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細胞分離液快速操作說明

時間:2013/1/15閱讀:2317
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備注:本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗

產(chǎn)品名稱 :
 人外周血淋巴細胞分離液 內(nèi)毒素<0.5EU科研級
品牌 :
 TBD
貨號 :
 LTS1077
規(guī)格 :
 200ml/瓶
細胞分離液快速操作說明和使用及保存中的注意事項:
注意1,分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫
度在20℃±2℃時分離效果。
2,使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
3,所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
4,*抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑
體積。
A. 小量分離-使用1-2ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:
1,取新鮮抗凝血1-2ml,與全血及組織勻漿稀釋液(Cat#2010C11191:1 混勻;
2,小心加于與混合液等體積的細胞分離液之液面上;
3,以400g(約1500 轉(zhuǎn)/分)離心15 分鐘半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子
此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞
層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含4-5ml 細胞洗滌液
Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞
重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細胞。
B. 中量分離-使用5-10ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:
1,取新鮮抗凝血5-10ml,與全血及組織勻漿稀釋液(Cat#2010C11191:1 混勻;
2,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=21
3,以500g(約1800 轉(zhuǎn)/分)離心15 分鐘半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子;
此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞
層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含10ml 細胞洗滌液
Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞
重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細胞。
C. 大量分離I-使用20ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:
1, 取新鮮抗凝血20ml 200g(約1100 轉(zhuǎn)/分)離心20 分鐘棄去血漿;
2,向棄去血漿的血細胞中加入全血及組織勻漿稀釋液(Cat#2010C111912ml 小心混勻;
3,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=21
4,以600g(約2000 轉(zhuǎn)/分)離心15 分鐘半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子
此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞
層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含20ml 細胞洗滌液
Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細胞。
D. 大量分離II-使用50ml新鮮抗凝血,骨髓,臍帶血:
1, 取新鮮抗凝血50ml HES-TBD550 1:1 混合后再與1 份注射用生理鹽水混勻20±2
靜置30 分鐘。吸取混濁的上清液備用,棄去底部紅細胞。
2,將步驟1 中留取的上清液以200g(約1100 轉(zhuǎn)/分)離心20 分鐘棄去上清保留沉淀細胞;
3,向沉淀的細胞中加入全血及組織勻漿稀釋液(Cat#2010C111920ml 小心混勻;
4,將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上;(混合液:分離液=21
5,以600g(約2000 轉(zhuǎn)/分)離心15 分鐘半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子;
此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞
層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含20ml 細胞洗滌液
Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞
重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細胞。

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