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透析就是在生物大分子制備過程中利用半透膜除去其中的鹽、少量有機(jī)溶劑和生物小分子雜質(zhì)以及濃縮樣品。簡(jiǎn)單來說既是用半透膜將大分子蛋白質(zhì)分離出來。透析時(shí),小于NWCO(截留分子量)的分子在透析膜二邊溶液濃度差產(chǎn)生的擴(kuò)散壓作用下滲過透析膜,其速度與濃度梯度、膜面積及溫度成正比。欲快速透析可采用直徑較小的透析袋以增加膜面積。更換袋外透析液或用磁力攪拌器,均能提高透析速度。
在透析過程中樣品在膜的一邊,緩沖液則在另一邊,小分子即向兩邊擴(kuò)散直到平衡為止,而大分子則會(huì)被半透膜截留在另一端。所以只要通過不斷更換緩沖液,即可將樣品中要除掉的小分子稀釋到足夠低的濃度。不同的分子量需要不同的孔徑。
從本質(zhì)上講仍是膜孔的孔徑控制分子量。例如300KD的透析袋孔徑14nm;100KD--5.5nm50KD--3nm;30KD--2.2nm;20KD--1.8nm;10KD--1.5nm;1KD--1.2nm;5D--1nm。按照球形蛋白分子量計(jì)算的結(jié)果,理論上來說只要所用的超濾膜截留分子量大于藥物分子量就可以。
分子量不同所選擇的透析袋不同,截留分子量從0.1-0.5到1000KD不等,需謹(jǐn)慎選擇。
透析膜分為生物技術(shù)纖維素酯(CE)膜,PH值范圍:2-9,溫度極限37℃。生物技術(shù)再生纖維素(RC)膜,PH值范圍:2-12,溫度極限60℃。以及標(biāo)準(zhǔn)級(jí)再生纖維素膜,PH值范圍:2-12,溫度極限121℃。
儲(chǔ)存條件:
透析膜浸泡在儲(chǔ)存液中,封放置于4-37 °C之間環(huán)境。
透析袋使用方法:
①把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度(10cm左右)的小段。
②用去離子水浸泡10分鐘左右,再用去離子水膜內(nèi)沖洗3次。(干型適量透析袋處理液(Fast-Tre Solution)稀釋100倍,將透析袋放于其中煮沸10分鐘)
③不使用的透析膜放回儲(chǔ)存液中,密封保存,接觸透析膜過程中必須戴手套。
④使用時(shí),一端用下沉透析袋夾子夾緊,灌滿水后,用手指適當(dāng)加壓,檢查不漏,方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。裝完樣品后,用上浮夾子夾緊袋口,可在袋內(nèi)放一玻璃珠,以使透析袋處于懸浮狀態(tài),即可進(jìn)行透析(詳見透析袋裝置簡(jiǎn)圖)。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。
五、透析后去除透析液方法:
透析后,透析袋中除樣品外還有一定量透析液,我們推薦使用美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)生產(chǎn)的透析脫水劑(Spectra/Gel Absorbent)。
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