登革熱檢測試劑操作說明書

目前市場上同一產(chǎn)品不同品牌的數(shù)量眾多，怎么識別好的產(chǎn)品和不好的產(chǎn)品呢？以及操作步驟的重要性，即使是一個好的產(chǎn)品，樣本處理不好也可能導(dǎo)致不好的結(jié)果，所以產(chǎn)品質(zhì)量、操作細節(jié)和樣本處理也決定了實驗的成果。

科潤達生物提供的是進口的登革熱試劑，以及包裝配送了完整的登革熱檢測試劑操作說明書，并且提供體貼的售后服務(wù)，上班期間有專業(yè)的指導(dǎo)技術(shù)人員解答問題，產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)質(zhì)保障，歡迎咨詢訂購。

下面介紹的是有關(guān)于德國IBL品牌采用ELISA方法檢測人血清和血漿中IgG抗體的登革熱試劑，如有需要了解其他方法或者類型的登革熱試劑，可以搜索科潤達生物網(wǎng)站或者在平臺留言聯(lián)系我們獲取資料。

登革熱IgG檢測試劑操作說明書

登革熱IgG檢測試劑盒預(yù)期用途
登革熱IgG檢測試劑盒可用于人血清、血漿中抗登革熱病毒IgG抗體的定性檢測。

登革熱IgG檢測試劑盒檢測原理

抗登革熱病毒IgG抗體的定性酶免檢測利用的ELISA技術(shù)。微孔板上預(yù)先包被了結(jié)合樣品相關(guān)抗體的登革熱病毒2型抗原。洗板除去未結(jié)合的樣品物質(zhì)后，加入辣根過氧酶標記的抗人IgG酶聯(lián)物。這一酶聯(lián)物可與捕獲到的登革熱病毒特異性抗體結(jié)合。

加入能產(chǎn)生藍色反應(yīng)產(chǎn)物的TMB底物液后，如果顯示藍色則可知已形成免疫復(fù)合物。所顯示顏色的強度與樣品中登革熱病毒特異性IgG抗體的量成正比。加入硫酸以終止反應(yīng),以便產(chǎn)生黃色的終點顏色。用一酶標儀在450m處讀取OD值。

登革熱IgG檢測試劑盒組成成分
1、微孔板：12×8可拆板條，包被有登革熱2型抗原，真空密封于鋁鉑金屬袋中。
2、樣品稀釋液：1瓶，內(nèi)含100ml樣品稀釋用緩沖液，pH2±0.2，液體為黃色，待用，白蓋。
3、終止液：1瓶，內(nèi)含15ml硫酸，0.2mol/l；待用，紅蓋
4、洗滌液（20×濃縮）：1瓶，50ml，含20倍濃縮的樣品洗滌液，pH7.2±0.2，白蓋
5、酶聯(lián)物：1瓶，含20ml HRP標記的兔抗人IgG，藍色，待用，黑蓋。
6、底物液：1瓶，含15ml TMB，待用，黃蓋。
7、登革熱 IgG陽性質(zhì)控：1瓶，2ml；黃色，待用，紅蓋
8、登革熱 IgG臨界質(zhì)控：1瓶，3ml；黃色，待用，綠蓋
9、登革熱 IgG陰性質(zhì)控：1瓶，2ml；黃色，待用，藍蓋

實驗所需材料（未提供）
1）可在450/620nm處讀數(shù)的酶標儀
2）37℃恒溫箱
3）自動或半自動洗板機
4）取樣吸頭（10µl和100µl）
5）旋渦混合器
6）去離子水或雙蒸水
7）試管
8）計時器

登革熱IgG檢測樣本要求
■樣本采集后（保存在2-8℃）應(yīng)該在5小時內(nèi)用于檢測，否則應(yīng)該保存在-20~-70℃。避免反復(fù)凍融，不推薦使用滅活的樣本。
■樣品稀釋：樣品使用樣品稀釋液以1:101的比例進行稀釋。

登革熱IgG檢測方法
實驗開始之前仔細閱讀操作步驟，嚴格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實驗結(jié)果。如果這實驗是在ELISA自動系統(tǒng)上進行，為了避免洗板的影響，我建議在洗板步驟時，洗板3次改成洗板5次，洗滌液從300µl增加到350µl。實驗開始之前，應(yīng)當在試劑盒提供的結(jié)果單上標記好所有的樣品和質(zhì)控品。取適當數(shù)量的板條置于板架上。

請至少做以下幾個孔：
1孔（例A1）做空白對照孔
1孔（例B1）做陰性質(zhì)控
2孔（例C1+ D1）做臨界質(zhì)控
1孔（例E1）做陽性質(zhì)控

我們建議您將質(zhì)控和病人樣品做雙份檢測。照說明書給出的實驗步驟進行操作，并避免不同步驟之間的時間隔無明顯差別。加每一質(zhì)控品和樣品時都應(yīng)當用新的取樣吸頭。把恒溫箱調(diào)至37 ± 1℃。

1）控品和已稀釋好的樣品分別100µl加入到相應(yīng)的微孔中，留下A1做空白對照孔。
2）蓋板。
3）37±1℃下溫育1h±5min

4）溫育后，移去粘性金屬板，棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，用300µl洗滌液洗板3次。避免反應(yīng)孔中的液體濺出。每次洗板間的浸潤時間都應(yīng)大于5秒。后在吸水紙上拍干。

注意：洗板步驟很重要，洗板不充分將可能導(dǎo)致結(jié)果不精確或錯誤的OD值。
5）除空白孔外，在每一微孔中都加入100µl登革熱抗IgG酶標物，蓋板。
6）室溫下溫育30，避免太陽直射
7）重復(fù)步驟4
8）在每一微孔中加入100µlTMB底物液
9）室溫下（20-25℃）避光溫育15min
10）按加TMB底物液的順序和速度在每一微孔中加入100µl終止液。溫育之后，包被板內(nèi)試劑的顏色由藍色變?yōu)辄S色。

注意：高陽性的病人樣品會引起染色劑沉淀。這些沉淀物會影響OD值的讀取。例如：我們建議按1：1的比例用生理鹽水預(yù)先稀釋樣品。然后按1：100的比例用稀釋液稀釋樣品，并將結(jié)果乘以2。

11）加終止液后30min之內(nèi)在450/620nm處讀取OD值。


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