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北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)

如何正確更換液相色譜柱

時間:2025-4-25 閱讀:307
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  液相色譜柱是高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)的核心部件,其性能直接影響分離效果和實驗結(jié)果。當(dāng)色譜柱出現(xiàn)柱效下降、壓力過高或污染嚴(yán)重時,需及時更換。以下是標(biāo)準(zhǔn)化更換流程及關(guān)鍵注意事項。
  一、前期準(zhǔn)備工作
  1. 儀器狀態(tài)確認(rèn)
  - 關(guān)閉輸液泵,停止流動相輸送
  - 關(guān)閉檢測器光源(如DAD檢測器需關(guān)閉氘燈/鎢燈)
  - 暫停數(shù)據(jù)采集程序,避免系統(tǒng)誤記錄異常信號
  2. 工具與材料準(zhǔn)備
  - 專用扳手(匹配柱接頭規(guī)格,通常為1/4英寸或3/8英寸)
  - 清潔無絨布、醫(yī)用酒精、一次性手套
  - 新色譜柱(確認(rèn)規(guī)格與舊柱一致:粒徑、孔徑、封端技術(shù)等)
  - 廢液收集容器
  3. 安全措施
  - 佩戴丁腈手套,防止溶劑殘留刺激皮膚
  - 清理操作臺面,避免工具滑落損傷色譜柱接口
  二、舊色譜柱拆卸步驟
  1. 系統(tǒng)泄壓
  - 打開排空閥(Vent Valve)或調(diào)零閥,緩慢釋放系統(tǒng)壓力至接近常壓
  - 注意:若直接拆卸高壓狀態(tài)下的柱子,可能導(dǎo)致溶劑噴濺和接頭損壞
  2. 斷開流動相管路
  - 按順序關(guān)閉泵→進(jìn)樣器→檢測器電源(不同品牌順序可能差異)
  - 標(biāo)記管路連接方向(如Autosampler出口→柱前過濾器→色譜柱入口)
  3. 拆卸柱接頭
  - 用扳手?jǐn)Q松兩端接頭螺母,保持旋轉(zhuǎn)力矩均勻(建議≤15N·cm)
  - 手持柱體六通閥位置,垂直向上拔出舊柱,避免碰撞流路系統(tǒng)
  4. 舊柱處理
  - 用乙醇沖洗柱內(nèi)殘留溶劑,封口后標(biāo)注"已失效"及更換日期
  - 污染嚴(yán)重時需用10%甲醇水溶液反沖再生
  三、新色譜柱安裝規(guī)范
  1. 外觀檢查
  - 確認(rèn)柱體標(biāo)簽信息(固定相類型、pH范圍、最大耐壓等)
  - 檢查柱床是否均勻(透過觀察窗查看填料有無裂紋或空洞)
  2. 接頭清潔與潤滑
  - 用蘸酒精的鏡頭紙擦拭新舊接頭的錐面,去除氧化層和殘留顆粒
  - 涂抹少量凡士林或石墨潤滑劑(避免進(jìn)入流路),增強(qiáng)密封性
  3. 精準(zhǔn)對接
  - 將新柱入口端對準(zhǔn)進(jìn)樣器出口,保持軸線水平,手動旋緊螺母
  - 使用扳手加固至指緊狀態(tài)(過度用力可能壓碎柱床)
  - 關(guān)鍵細(xì)節(jié):確保箭頭方向與流動相流向一致(通常標(biāo)記為"→")
  4. 排出空氣
  - 開啟泵低速(如0.2mL/min)沖洗甲醇,輕敲柱體排出氣泡
  - 觀察檢測器基線,待壓力穩(wěn)定且無毛刺峰后恢復(fù)正常流速
  四、系統(tǒng)調(diào)試與驗證
  1. 梯度試運行
  - 運行標(biāo)準(zhǔn)測試程序(如茶堿混合樣品)
  - 對比新舊柱分離度、塔板數(shù)、保留時間等參數(shù)
  2. 壓力監(jiān)測
  - 正常柱壓應(yīng)低于廠商標(biāo)稱值(如C18柱通常≤400bar)
  - 突然升高可能提示接頭泄漏或柱篩板堵塞
  3. 基線穩(wěn)定性
  - 走空白梯度30分鐘,基線漂移應(yīng)<0.05mAU/hour
  - 噪聲過大需檢查檢測池是否污染或光源老化
  五、常見問題與解決方案
  1. 泄漏判斷
  - 接頭處濕潤:需重新潤滑并收緊螺母
  - 柱墻滲液:立即停泵,更換密封墊圈
  2. 氣泡處理
  - 逆向沖洗(從出口端注入溶劑)或超聲水浴除氣
  - 嚴(yán)重氣泡需拆卸柱篩板排氣后重裝
  3. 柱效異常
  - 檢查流動相是否脫氣充分(建議超聲30分鐘)
  - 驗證樣品濃度是否超載(建議稀釋至線性范圍)
  六、維護(hù)與記錄
  1. 填寫更換日志
  - 記錄舊柱使用時長、更換原因、新柱批號等信息
  - 建立柱效能追蹤檔案(如每100次進(jìn)樣后測塔板數(shù))
  2. 存儲備用柱
  - 未開封色譜柱需直立保存于干燥器,避免溫差導(dǎo)致冷凝水
  - 已使用過的柱子需標(biāo)注溶劑封存狀態(tài)(如甲醇/水=7:3)

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