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反相液相色譜柱分配色譜
反相液相色譜柱色譜法的基本原理
利用樣品混合物中各組分理、化性質(zhì)的差異，各組分程度不同的分配到互不相溶的兩相中。當(dāng)兩相相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，各組分在兩相中反復(fù)多次重新分配，結(jié)果使混合物得到分離。
反相液相色譜柱分配色譜
原理:固定液機(jī)械的吸附在惰性載體上，樣品分子依據(jù)他們在流動(dòng)相和固定相間的溶解度不同，分別進(jìn)入兩相分配而實(shí)現(xiàn)分離。
固定相：將一種極性或非極性固定液吸附在惰性固相載體上。如全多孔微粒硅膠吸附劑。
根據(jù)極性不同分類：正相分配色譜—固定相載體上涂布的是極性固定液；
流動(dòng)相是非極性溶劑；
可分立極性較強(qiáng)的水溶性樣品；
弱極性組分先洗脫出來。 反相分配色譜—固定相載體上涂布的是非極性或弱極性固定液；
流動(dòng)相是極性溶劑；
強(qiáng)極性組分先洗脫出來。
液-液分配色譜固定相中的固定液體往往容易溶解到流動(dòng)相中去，所以重現(xiàn)性很差，且不能進(jìn)行梯度洗脫，已經(jīng)不大為人們所采用。
反相液相色譜柱的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組份zui先被沖洗出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。