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細胞核蛋白/漿蛋白抽提試劑盒（Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit）
提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提核蛋白與漿蛋白的方法。約
90 分鐘就可以完成培養(yǎng)細胞的核蛋白與漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白為非變性，
有活性，可以用于Western、EMSA、footprinting、報告基因檢測以及酶活力測定等
后續(xù)操作。本試劑盒是通過細胞漿蛋白抽提試劑A 和B，在低滲透壓條件下，使細
胞充分膨脹后破壞細胞膜，釋放出漿蛋白，然后通過離心得到細胞核沉淀。zui后通
過高鹽的細胞核蛋白抽提試劑抽提得到核蛋白。本試劑盒可以抽提50 個，數(shù)量為
2×106 個Hela 細胞（約40mg）的樣品。可根據(jù)需要按比例放大，縮小提取規(guī)模。
Elisa試劑盒 11:21:57
v 注意事項：
1. 需自備PMSF， PMSF 一定要在抽提試劑加入到樣品前2-3 分鐘內(nèi)加入，以免
3. 對于組織樣品，本試劑盒僅適合于新鮮組織，對凍存過的組織抽提效果差。可
4. 使用本試劑盒抽提得到的細胞核蛋白與細胞漿蛋白都可以直接用博邁德生產(chǎn)的
BCA 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。但不適合用Bradford 法測定蛋白濃度。
Elisa試劑盒 11:22:56
v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
準備溶液：室溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當
量的CER A 備用，在需要加入前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF 至終濃度為1mM。取適當量
的NER 備用，在需要加入前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF 至終濃度為1mM。如果目標蛋白
含豐富的半胱氨酸，可在CER A、NER 中加入DTT 至終濃度0.5mM。
1. 對于貼壁細胞：用PBS 洗一遍，用細胞刮子刮下細胞，或用EDTA 溶液處理細胞
使細胞不再貼壁很緊，并用移液器吹打細胞（不用胰酶消化，因為可能降解蛋
白）。500×g 離心2-3 分鐘，盡可能吸棄上清，留下細胞沉淀備用。盡量避免用
2. 對于懸浮細胞：用PBS 洗一遍，500xg 離心2-3 分鐘，盡可能吸棄上清，留下細
1） 把組織盡可能切成非常細小的碎片。在PBS 里面勻漿制成細胞懸液，500xg 離心
2） 把組織稱重后，把組織盡可能切成非常細小的碎片，按照每50 毫克組織加入500
微升的比例加入CER A，勻漿后把勻漿液轉(zhuǎn)移到塑料離心管內(nèi)，接步驟5。在步
驟7 按照每200 微升CER A 加11 微升比例加入CER B。
4. 每20 微升細胞沉淀加入200 微升添加了PMSF 的CER A。（對于2×106 個Hela 細
5. zui高速劇烈Vortex 15 秒，把細胞沉淀*懸浮并分散開。（如果細胞沉淀沒有完
7. 加入CER B 11 微升。zui高速劇烈Vortex 5 秒，冰浴1 分鐘。
8. zui高速劇烈Vortex 5 秒，4℃ 14,000-16,000g 離心5 分鐘。
9. 立即吸取上清至一預冷的離心管中，即為抽提得到的細胞漿蛋白?？梢粤⒓词褂茫?/a>
也可以凍存。（千萬不要觸及沉淀，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免觸
10. 對于沉淀，*吸盡殘余的上清，加入50 微升添加了PMSF 的NER。（不吸盡上
11. zui高速劇烈Vortex 15-30 秒，把細胞沉淀*懸浮并分散開。然后放回冰浴中，
每隔10 分鐘再高速劇烈Vortex 15－30 秒，共40 分鐘。
Cytoplasmic Extraction Reagent A（CER A） 4°C. 10ml
Cytoplasmic Extraction Reagent B（CER B） 4°C. 0.55ml
Nuclear Extraction Reagent （NER） 4°C. 2.5ml
12. 4℃ 14,000－16,000xg 離心10 分鐘。
13. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞核蛋白?？梢粤⒓词褂茫?/a>
也可以-70℃凍存。
Elisa試劑盒 11:23:54
v 問題與解決方法
蛋白酶活性偏高-建議：除了PMSF，可加入多種protease inhibitor
勻漿過度，不足或者不均勻-建議：優(yōu)化勻漿時間和條件
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