1 Daicel手性柱使用溶劑的限制
*,手性柱固定相對(duì)溶劑很敏感,使用時(shí)稍有不慎,即可對(duì)固定相造成不可修復(fù)的損傷。
一般情況下,要避免使用的溶劑有丙酮、氯仿、二氯甲烷、THF和DMSO等,即使少量上述溶劑殘留在管路、進(jìn)樣閥中也是色譜柱的潛在威脅,所以事先必須清洗干凈。
2 為什么柱效會(huì)降低?有沒有再生方法?
所有大賽璐柱子在出廠前均已檢測(cè)柱效合格。
造成柱效降低的原因有:
1) 柱效急速下降
絕大多數(shù)情況是色譜柱固定相被損傷(溶解/水解脫落),造成固定相損傷的物質(zhì)可能來源于樣品,溶劑,也可能來源于上一次進(jìn)樣殘留于管路、進(jìn)樣閥中的雜質(zhì)。
這種情況對(duì)柱子沖洗或再生已無效。
2) 柱效逐漸下降
原因:有強(qiáng)保留物質(zhì)逐漸聚集在柱頭篩板甚至是固定相上
解決辦法:用強(qiáng)溶劑沖洗或更換篩板
3) 舊柱子能分開的化合物換上新柱子就分不開了
原因:“記憶效應(yīng)”(有時(shí),也有批次間的差異),一些強(qiáng)保留物質(zhì)(如additive)保留在固定相上對(duì)手性誘導(dǎo)環(huán)境有一定的影響。
解決辦法:如果之前用過添加劑,就在流動(dòng)相中繼續(xù)添加此類添加劑,并對(duì)柱子平衡數(shù)小時(shí)再進(jìn)樣,但此方法有時(shí)仍然解決不了問題,這時(shí)應(yīng)該可慮更換其它的分離條件。
3 如果樣品不溶于正己烷/醇體系,怎么辦?
一般情況下,分析用時(shí),0.5-1mg/mL的濃度就可以滿足檢測(cè),所以不用加大樣品濃度
對(duì)于酸、堿化合物,在流動(dòng)相中適當(dāng)?shù)募尤肷倭康膹?qiáng)酸或強(qiáng)堿(如TFA/DEA)有助于樣品的溶解,推薦添加濃度在0.1-0.2%,大于此濃度會(huì)損壞固定相。
4 幾種常用手性柱的使用(以5μ和10μ填料為例)
1)Chiralpak AD
IPA:0-100% in alkane(n-hexane or iso-hexane, or n-heptane)
EtOH: 0-15% in alkane or 60-100% in alkane(n-hexane or iso-hexane, or n-heptane)
MeOH: (1)0-100% EtOH or IPA in MeOH or 0-15% ACN in MeOH
Ideal starting conditions: MeOH/EtOH 50:50(v/v) when alcohol mixtures are required
(2)0-15% in alkane or 60-100% in alkane(n-hexane or iso-hexane, or n-heptane)
【注意:使用純極性溶劑做流動(dòng)相后,此色譜柱應(yīng)做到專柱】
ACN:not compatible with alkane
0-100% IPA in ACN or 0-15% MeOH or EtOH in CAN
【注意:使用純極性溶劑做流動(dòng)相后,此色譜柱應(yīng)做到專柱】
MTBE: Not allowed
Acid: TFA or CH3COOH, <0.5%, Typically 0.1%
Base: DEA or Butyl amine or Ethanol amine, <0.5%, Typically 0.1%
Column-Temp: below 40DEG
2)Chiralpak AD-H
同Chiralpak AD,不同之處在于,當(dāng)使用正己烷/乙醇(甲醇)體系時(shí),醇比例范圍可以是0-100%
3) Chiralpak OD-H
同AD-H,不同之處在于,OD-H可以使用MTBE/alkane(或Alkane/EtOH),MTBE<50%, 當(dāng)使用MTBE后,色譜柱平衡時(shí)間要加長(zhǎng)
4) Chiralpak OD
同OD-H,不同之處在于,OD不能使用ACN體系