手性色譜柱(ChiralHPLCColumns)是由具有光學活性的單體,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相(ChiralStationaryPhases)。通過引入手性環(huán)境使對映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異,從而達到光學異構(gòu)體拆分的目的。要實現(xiàn)手性識別,手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結(jié)果。這些相互作用通過影響包埋復合物的形成,特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結(jié)果。由于這種作用力較微弱,因此需要仔細調(diào)節(jié)、優(yōu)化流動相和溫度以達到最佳分離效果。
分離度下降的原因有可能是色譜柱以外的色譜條件發(fā)生了變化,或者色譜柱受損柱效發(fā)生了變化。首先查看是否是因為溫度、流動相成分等外在因素發(fā)生了變化導致分離度下降,如果排除了各種外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降導致的。如果分離度在短時間內(nèi)急劇下降伴隨柱壓上升,可能是有強極性溶劑損害了柱子;如果分離度在長時間內(nèi)慢慢下降,可能是柱頭受污染或柱頭塌陷,需要更換保護柱或者更換分析柱。