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ELISA試驗(yàn)常見標(biāo)本收集介紹
閱讀：118 發(fā)布時(shí)間：2024-5-20酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，下面就常見標(biāo)本收集介紹：
1、血清
1、將全血收集到未經(jīng)處理的測(cè)試管中，或者到不含抗凝劑的管中，如 BD 血清用真空采血管（目錄號(hào)：367812)。
2、在室溫下連續(xù)孵育 20 分鐘。
3、4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘。
4、立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。
2、組織提取物
1、用干凈的工具解剖組織，最好在冰上、盡快進(jìn)行，以防止被蛋白酶降解。
2、將組織置于圓底的微量離心管中，并浸入液氮中進(jìn)行“速凍"。將樣品保存在 -80℃ 下以便后續(xù)使用或放置在冰上進(jìn)行直接勻漿。
3、對(duì)于約 5 mg 的組織片，可向管中添加約 300 µl *提取緩沖液（查看細(xì)胞/組織提取緩沖液配方），然后用電動(dòng)勻漿器勻漿。
4、清洗刀片兩次，每次清洗使用 300µl *提取緩沖液，然后在 4℃ 下維持恒定攪拌 2 小時(shí)（例如置于冷室中的回旋振蕩器上）。
5、 4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘。置于冰上，將上清液（這里是指可溶的蛋白質(zhì)提取物）分裝至新、預(yù)冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。
3、細(xì)胞提取物
1、將組織培養(yǎng)板放置在冰上
2、吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷PBS 輕輕洗滌細(xì)胞一次
3、吸出 PBS ，加入100 mm 培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液
4、收集細(xì)胞至在傾斜板中，然后移至經(jīng)過預(yù)冷的離心管中。
5、短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘
6、在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘，沉淀不溶性內(nèi)容物
7、將上清液（這里是指可溶性細(xì)胞提取物）分裝至預(yù)冷的離心管中，并于 -80℃ 保存。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。
4、乳汁
1、收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。
2、分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。
5、尿液
1、收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。
2、等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少凍融循環(huán)次數(shù)。