IPTG異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（Sigma/Merck），訂購(gòu)： 56980388！

中文名稱: 異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷

中文別名：異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷,異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖甙

商品名稱: Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside

英文簡(jiǎn)稱: IPTG

產(chǎn)品別名: Isopropyl β-D-Thiogalactoside

CAS : 367-93-1

產(chǎn)品純度: Sigma ≥99%, Merck ≥98% 

產(chǎn)品性狀: 白色或白色粉末,溶于水后呈清亮無色液體

分 子 式: C9H18O5S

分 子 量: 238.30

保存溫度: 2-8°C冷藏保存 ,配制好后保存于-20°C，室溫可放置一個(gè)月

主要作用：異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用

IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)。基于這個(gè)特性，當(dāng)pUC系列的載體DNA（或其他帶有l(wèi)acZ 基因載體DNA）以lacZ 缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體的載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，如果在平板培養(yǎng)基中加入X–Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體。此外，它還可以作為具有l(wèi)ac或tac等啟動(dòng)子的表達(dá)載體的表達(dá)誘導(dǎo)物使用。

誘導(dǎo)原理

首先

    E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動(dòng)序列P上游還有一個(gè)分解（代謝）物基因激 活蛋白（CAP）結(jié)合位點(diǎn)。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個(gè)酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達(dá) 。

其次

   在沒有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時(shí)，I序列在PI啟動(dòng)序列操縱下表達(dá)的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié) 合，抑制轉(zhuǎn)錄起動(dòng)。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與半乳糖相同，是一 種作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。

使用方法

    首先把IPTG配制成24 mg/ml（100 μM）的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)DNA段插入至pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長(zhǎng)出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組體）。

作用

誘導(dǎo)外源基因的表達(dá)，普遍應(yīng)用于原核表達(dá)系統(tǒng)，使其表達(dá)量增高，產(chǎn)物穩(wěn)定，具有易鑒定，易純化的優(yōu)點(diǎn)。

注意事項(xiàng) ：

   ◆培養(yǎng)噬菌體時(shí)，Top agar中的添加量為：25 μl/3 ml（24 mg/ml）

   ◆含有IPTG的培養(yǎng)基4℃避光保存，須在1~2周內(nèi)使用。

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