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U2932細胞,人彌漫大B細胞株

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更新時間:2024-08-13 19:56:44瀏覽次數(shù):2634

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胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或空泡。

細胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì),表明細胞處于非健康狀態(tài)。

同樣,細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細胞處于非健康狀態(tài)。

產(chǎn)生空泡可能是老化或是細胞狀態(tài)不好。

如果發(fā)生在單層細胞:一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環(huán)),則提示該細胞已經(jīng)死亡,即zui終干枯死亡。

如果發(fā)生在懸浮細胞:正常懸浮細胞清晰透明,如胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蜃儨啙岜砻骷毎軗p,甚至死亡。

怎樣去除死細胞?單層培養(yǎng)的細胞死亡后,一般會漂浮起來,因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養(yǎng)細胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細胞。

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 復(fù)蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶,對細胞造成損害。

貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。

懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。

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