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公司動(dòng)態(tài)

在哺乳動(dòng)物體內(nèi)利用改造的CRISPR/Cas9治療糖尿病

點(diǎn)擊次數(shù):1305 發(fā)布時(shí)間:2018-4-3

一項(xiàng)新的研究中,來(lái)自美國(guó)沙克生物研究所的研究人員開(kāi)發(fā)出CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)的一種新版本,從而允許他們激活靶基因,同時(shí)不會(huì)導(dǎo)致DNA斷裂,這就潛在地克服了利用基因編輯技術(shù)治療人類疾病的一個(gè)重大的障礙。相關(guān)研究結(jié)果于2017年12月7日在線發(fā)表在Cell期刊上,論文標(biāo)題為“In Vivo Target Gene Activation via CRISPR/Cas9-Mediated Trans-epigenetic Modulation”。
 

圖片來(lái)自Salk Institute。

 

大多數(shù)CRISPR/Cas9系統(tǒng)會(huì)在靶向編輯或刪除的基因組區(qū)域中產(chǎn)生“雙鏈斷裂(double-strand break, DSB)”,但是很多人反對(duì)在活人的DNA中產(chǎn)生這樣的雙鏈斷裂。作為一項(xiàng)概念驗(yàn)證研究,這些研究人員在小鼠模型中利用他們的新方法來(lái)治療包括糖尿病、急性和肌肉萎縮癥在內(nèi)的幾種疾病。

論文通信作者、沙克生物研究所基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)室教授Juan Carlos Izpisua Belmonte說(shuō),“盡管許多研究已證實(shí)CRISPR/Cas9能夠作為一種強(qiáng)有力的工具用于基因治療,但是人們?cè)絹?lái)越擔(dān)心這種技術(shù)產(chǎn)生的雙鏈斷裂會(huì)產(chǎn)生不想要的突變。我們能夠解決這個(gè)問(wèn)題。”

在初始的CRISPR/Cas9系統(tǒng)中,酶Cas9與指導(dǎo)它靶向到基因組中合適位點(diǎn)上的向?qū)NA(gRNA)結(jié)合在一起,從而在DNA上產(chǎn)生雙鏈斷裂。近期,一些人開(kāi)始使用Cas9的“死亡”形式(即dCas9):仍然能夠靶向基因組中的特定位點(diǎn),但是不再切割DNA。相反,dCas9與激活靶基因的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(transcriptional activation domain, TAD,起著分子開(kāi)關(guān)的作用)結(jié)合在一起。但是由此產(chǎn)生的蛋白---dCas9-TAD---塊頭太大而不適合被包裝到通常用于運(yùn)送編碼這些蛋白的基因到活體細(xì)胞內(nèi)的腺相關(guān)病毒(AAV)載體中。缺乏一種的運(yùn)送系統(tǒng)使得很難在臨床應(yīng)用中使用這種工具。

Izpisua Belmonte團(tuán)隊(duì)將Cas9/dCas9與一系列不同的TAD結(jié)合在一起以便發(fā)現(xiàn)一種即便這些蛋白不融合在一起時(shí)也能夠發(fā)揮作用的組合。換言之,將Cas9或dCas9包裝到一種AVV載體中,將TAD和gRNA包裝到另一種AAV載體中。他們還對(duì)gRNA進(jìn)行優(yōu)化以便確保所有的這些組分zui終出現(xiàn)在基因組的合適位點(diǎn)上,而且靶基因受到強(qiáng)烈地激活。

論文共同*作者、Izpisua Belmonte實(shí)驗(yàn)室研究員Hsin-Kai (Ken) Liao說(shuō),“這些組分一起都在有機(jī)體中發(fā)揮作用,從而影響內(nèi)源性基因。”這種新方法以這種方式在表觀遺傳學(xué)上發(fā)揮作用,這意味著它影響基因活性,但不改變DNA序列。

為了驗(yàn)證這種方法,這些研究人員使用了急性腎損傷、1型糖尿病和一種肌肉萎縮癥的小鼠模型。在每種小鼠模型中,他們?cè)O(shè)計(jì)出他們的CRISPR/Cas9系統(tǒng)來(lái)增強(qiáng)可能潛在地逆轉(zhuǎn)疾病癥狀的內(nèi)源性基因的表達(dá)。就急性而言,他們激活兩個(gè)已知參與腎臟功能的基因,并觀察到不僅這些基因表達(dá)的蛋白水平發(fā)生增加,而且這會(huì)改善急性腎臟損傷發(fā)生之后的腎臟功能。就1型糖尿病而言,他們旨在增強(qiáng)能夠產(chǎn)生β細(xì)胞(即一種分泌胰島素的細(xì)胞)的基因的活性。這種新方法又一次發(fā)揮作用,成功地降低1型糖尿病小鼠模型中的血糖水平。就肌肉萎縮癥而言,他們讓之前已經(jīng)證實(shí)逆轉(zhuǎn)疾病癥狀的基因表達(dá),包括不能夠很容易地通過(guò)傳統(tǒng)的病毒介導(dǎo)的基因療法加以運(yùn)送的一個(gè)特別大的基因。

論文共同*作者、Izpisua Belmonte實(shí)驗(yàn)室研究員Fumiyuki Hatanaka補(bǔ)充道,“當(dāng)我們看到小鼠的研究結(jié)果時(shí),我們感到非常地激動(dòng)人心。我們能夠誘導(dǎo)基因激活,并且同時(shí)觀察到生理變化。”

如今,Izpisua Belmonte團(tuán)隊(duì)正在努力改善他們的CRISPR/Cas9系統(tǒng)的特異性,并且將它應(yīng)用于更多的細(xì)胞類型和器官中,以便治療更多的人類疾病,以及讓特定的器官恢復(fù)青春,并逆轉(zhuǎn)衰老過(guò)程和年齡相關(guān)的癥狀,如聽(tīng)力下降和黃斑變性。他們說(shuō),在開(kāi)展人體臨床試驗(yàn)之前,還將需要進(jìn)行更多的安全性測(cè)試

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