Qiagen 202602/202605 HotStar HiFidelity Polymerase Kit 

用于高靈敏度，高保真熱啟動(dòng)PCR

• 高靈敏度、高特異性

• *的UA/TA克隆

• 保真性比Taq DNA Polymerase高10倍

• 可在室溫下構(gòu)建反應(yīng)體系，酶活化速度快

  
  

經(jīng)優(yōu)化的即用型試劑盒包括高保真PCR所需的所有試劑、酶、緩沖液和dNTPs。HotStar HiFidelity DNA Polymerase是一種經(jīng)特異修飾的產(chǎn)生A突出末端的熱啟動(dòng)校對(duì)酶，能夠直接、高效的進(jìn)行UA/TA克隆。緩沖液中包含F(xiàn)actor SB，可在PCR體系建立時(shí)防止引物和模板的降解，提供高特異性和高保真PCR。此外，Q-Solution能夠有效擴(kuò)增難擴(kuò)增的模板（如富含GC的模板）。

Performance

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含一種經(jīng)特異修飾的熱啟動(dòng)校對(duì)酶，可在PCR體系建立時(shí)防止引物和模板的降解，提供高保真PCR，無(wú)需優(yōu)化。通過(guò)檢測(cè)，HotStar HiFidelity DNA Polymerase Kit可確保高特異性和高靈敏度擴(kuò)增（參見(jiàn)"Highly sensitive and reliable PCR"）。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性比Taq DNA polymerase高10倍。新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含專(zhuān)有的Factor SB，提高PCR的靈敏度和可靠性，尤其在起始模板量較少的條件下。該試劑盒同時(shí)提供Q-Solution，可進(jìn)一步優(yōu)化PCR（參見(jiàn)"Amplification of difficult templates"）。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase特性

濃度：2.5 units/μl
5'–>3'外切酶活性：否
3'–>5'外切酶活性：是
額外添加A（末端轉(zhuǎn)移酶活性）：是
半衰期：95°C條件下>4小時(shí)
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNase污染：否

Qiagen 202602/202605 HotStar HiFidelity Polymerase Kit 

Principle

通常利用高保真酶3'→5'核酸外切酶的活性去除錯(cuò)配的整合堿基。但是，該活性會(huì)在PCR體系建立和起始時(shí)降解引物，而導(dǎo)致非特異性啟動(dòng)、擴(kuò)增，甚至擴(kuò)增產(chǎn)物失敗，尤其在模板量較少的條件下。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase

HotStar HighFidelity DNA Polymerase是從新型Pyrococcus spp.中特異分離的，經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾使聚合酶和核酸外切酶失活。5分鐘熱啟動(dòng)激活酶組分，使PCR起始階段就有高校對(duì)能力。*的修飾確保體系建立過(guò)程中引物和酶的完整性，防止錯(cuò)誤啟動(dòng)。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的可靠性能確保高特異性和高靈敏度的擴(kuò)增。

HotStar HiFidelity PCR Buffer

新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含*的PCR添加劑，以及濃度已經(jīng)優(yōu)化的dNTPs和MgSO4。Factor SB是一種**的PCR添加劑，提高PCR的靈敏度和可靠性（參見(jiàn)"Highly sensitive and reliable PCR"）。新型的Factor SB可確保模板DNA的完整性，該DNA常常會(huì)被具有3'→5'核酸外切酶活性的高保真酶降解。

預(yù)優(yōu)化試劑能夠可靠的擴(kuò)增特異性PCR產(chǎn)物，且出錯(cuò)率低。該緩沖液通過(guò)提高每個(gè)PCR擴(kuò)增退火過(guò)程特異性引物的結(jié)合比例，確保PCR每個(gè)循環(huán)特異性擴(kuò)增（參見(jiàn)"Increased specificity of primer annealing"）。*的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡組合，使得HotStar HiFidelity PCR Buffer與傳統(tǒng)的PCR緩沖液相比在很寬的溫度和Mg²⁺濃度范圍內(nèi)都有嚴(yán)格的引物退火條件和高度的特異性，無(wú)需進(jìn)行耗時(shí)的優(yōu)化。

HotStar HiFidelity PCR Buffer也含有濃度經(jīng)特定優(yōu)化的dNTPs，用于方便的建立PCR反應(yīng)體系和獲得可靠的結(jié)果。該緩沖液zui大程du上增加了HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性，確保低出錯(cuò)率。HotStar HiFidelity Polymerase Kit靈敏度高、特異性強(qiáng)以及使用HotStar HiFidelity PCR Buffer而無(wú)需優(yōu)化的特性使其適合多種高保真PCR應(yīng)用。

Q-Solution

HotStar HiFidelity Polymerase Kit同時(shí)提供Q-Solution，一種新型的PCR添加劑，通過(guò)更改DNA熔解行為促進(jìn)難擴(kuò)增模板的擴(kuò)增。這種*的試劑可進(jìn)一步優(yōu)化由模板引起的表現(xiàn)不理想的PCR，如過(guò)多的二級(jí)結(jié)構(gòu)和富含GC的模板（參見(jiàn)"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加劑，Q-Solution的濃度是確定的，沒(méi)有毒性，并且保證PCR的純度。而且PCR中加入Q-Solution不會(huì)影響PCR的準(zhǔn)確性。

完整的試劑盒規(guī)格

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含PCR所需的所有組分。無(wú)需額外購(gòu)買(mǎi)其他試劑或緩沖液。

Procedure

HotStar HiFidelity操作流程高效，只需按照試劑盒中已優(yōu)化的試驗(yàn)方案操作即可。HotStar HiFidelity DNA Polymerase經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾，可以暫時(shí)性的使聚合酶和3'–>5'核酸外切酶失活。這種抑制作用可使引物和模板在PCR體系建立和循環(huán)起始階段過(guò)度降解。95°C條件下孵育5分鐘即可激活聚合酶和校對(duì)活性，可以整合入已有的熱循環(huán)程序。這種修飾確保可在室溫下方便的建立反應(yīng)體系，而不會(huì)影響PCR的特異性和產(chǎn)量。

TA/UA克隆

與其他高保真DNA聚合酶相比，使用HotStar HiFidelity DNA Polymerase獲得的PCR產(chǎn)物可直接用于TA-或UA-克?。▍⒁?jiàn)"Efficient TA/UA cloning"）。

產(chǎn)物的長(zhǎng)度和靈敏度

鑒于HotStar HiFidelity Polymerase Kit的高靈敏度，即使使用極微量的起始原料也可擴(kuò)增片段（如1 ng的人基因組DNA）。使用基因組DNA獲得的產(chǎn)物長(zhǎng)度可達(dá)5 kb，而λDNA獲得的產(chǎn)物長(zhǎng)度可達(dá)10 kb，表明HotStar HiFidelity Polymerase Kit適合多種應(yīng)用，包括用于克隆的長(zhǎng)片段DNA的擴(kuò)增。

Applications

HotStar HiFidelity Polymerase Kit適合多種要求高靈敏度和低出錯(cuò)率的熱啟動(dòng)PCR應(yīng)用，如克隆和定點(diǎn)突變。