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北京諾博萊德科技有限公司

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北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學試劑>>PCR相關(guān)>> 715172× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
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715172× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)

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  • 瀏覽次數(shù):
  • 北京諾博萊德科技有限公司
  • 2025-04-23 09:29:19
  • 北京市
  • 北京
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【簡單介紹】

品牌 NobleRyder/諾博萊德 貨號 71517
規(guī)格 5x 1ml / 100x 1ml 供貨周期 現(xiàn)貨
主要用途 適合于高保真地擴增6kb以內(nèi)的PCR 產(chǎn)物 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
本產(chǎn)品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,濃度為2×。該酶所具有的chao強3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高,保真性是Taq DNA Polymerase的80倍,同時具有合成速度快的特點,
2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)

【詳細說明】

2× KOD PCR Master Mix (含染料)


2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān) 

目錄號:71517

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品成份

71517-05

71517-0100

2× KOD PCR Master Mix

5× 1 ml

100× 1 ml

保存條件

-20℃保存,有效期 2 年。經(jīng)常使用,可置于 4 °C 保存,有效期 3 個月。

產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,濃度為2×。該酶所具有的chao強3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高,保真性是Taq DNA Polymerase的80倍,同時具有合成速度快的特點,聚合速度約為普通Pfu DNA Polymerase的5倍,Taq DNAPolymerase的2倍,達到100-138bp/秒,可以在短時間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的擴增產(chǎn)物,特別適合于高保真地擴增6kb以內(nèi)的PCR 產(chǎn)物,擴增所得的DNA為平末端,可用于基因克隆、表達及突變分析等分子生物學實驗。

KOD擴增的PCR產(chǎn)物為平末端(Blunt),可直接用于Blunt載體克隆

本產(chǎn)品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳;也可經(jīng)過純化處理,以用于酶切、連接、測序等后續(xù)操作。

產(chǎn)品特點

1. 高產(chǎn):產(chǎn)量是普通 Taq 酶的 2 倍!

2. 高效:延伸速度 100-138bp/sec!

3. 高成功率:對于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復雜模板有良好效果!

 

2 × KOD PCR Master Mix 使用說明:

一、配制 PCR 反應(yīng)體系:(于冰上配制)

Component

20 μl Reaction

50 μl Reaction

終濃度

2× KOD PCR Master Mix

10 μl

25 μl

1 ×

Forward Primer(10 μM)

0.4 μl

1 μl

0.2 μM

Reverse Primer(10 μM)

0.4 μl

1 μl

0.2 μM

Template DNA

<0.2 μg

<0.5 μg

as required

ddH2O

up to 20 μl

up to 50 μl


參考模板用量:(以 50 μl 反應(yīng)體系為例)

質(zhì)粒:0.1-10 ng;

細菌基因組:10-100 ng;

人類基因組:50-150 ng;

cDNA:1-5 μl from RT。

注意: ddH2O 補足反應(yīng)體系(體積)至 50 μl。實際操作中,首先要計算好需要補加 ddH2O 的量以后,建議先加水,然后按上述順序添加其它成分,最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混勻后,離心數(shù)秒使反應(yīng)混合物沉到管底,然后將反應(yīng)管置于 PCR 儀中進行擴增。

二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件:(請根據(jù)實際情況適當調(diào)整)

Step

Temperature

Time

Cycle Number

Initialdenaturation

94℃

3 minutes


Denaturation

94℃

20-30 seconds

30-35 cycles

Annealing

50-60℃

20-30 seconds

Extension

72℃

1-4kb / minute

Final Extension

72℃

5 minutes



4-8℃

Hold


注意:一般情況下,Annealing Temperature = Tm - 5°C

如果擴增片段小于 4 kb,建議 KOD 酶的延伸速度為 1kb / 15 sec;

如果擴增片段大于 4 kb,建議延伸速度為 1kb / 20-30 sec。

三、結(jié)果檢測:反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān) 

    
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