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| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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植物RNA核酸免提取試劑盒（多糖多酚類）
試劑盒應(yīng)用
本試劑盒采用專門針對多糖多酚類植物樣本開發(fā)的裂解液PP，在10分鐘內(nèi)完成植物葉片、根、莖、花蕊、種子等的裂解、提取和純化。提取對象包括棉花、馬鈴薯、鐵皮石斛等。整個提取無需使用蛋白酶K等酶類制劑。該配方中含有RNA保護(hù)劑，能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整，從而提高產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫構(gòu)建等。
本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。
試劑盒組成
組分 | Col-R0202（50T） | 編號 |
裂解液PP | 35 mL | Col-R0202A |
洗滌液PWA | 25 mL | Col-R0202B |
洗滌液PWB | 12 mL | Col-R0202C |
洗脫液P | 5 mL | |
RNA吸附柱 | 50套 | Col-R0202E |
備注：第一次使用前，在洗滌液PWB中加入48mL無水乙醇，并標(biāo)記“√"和時間，避免重復(fù)加入。
保存條件
室溫保存一年。
自備材料
水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、1.5mL無RNase離心管、β-巰基乙醇、DNase I（2U/μL，或貨號QR0102）
使用方法
1. 20-100mg新鮮植物樣本經(jīng)過液氮研磨后，加入700μL裂解液PP和35μLβ-巰基乙醇，渦旋30秒。
2. 55℃孵育1分鐘。
備注：淀粉含量高的樣本直接進(jìn)行步驟3。
3. 12,000rpm離心1分鐘，吸取500μL上清液。
4. 加入250μL無水乙醇，上下顛倒混勻。
5. 全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液。
6. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液PWA，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。
7. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液PWB，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。
8. 重復(fù)步驟7一次。
9. 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。
10. 將RNA吸附柱放入新1.5mL無RNase離心管，加入30-50μL 洗脫液P，室溫放置1分鐘。
11. 12,000rpm離心2分鐘，得到RNA溶液，-80℃保存。
注意事項
1. 務(wù)必在超凈臺中進(jìn)行操作，常換手套，防止RNA降解。
2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取。
3. 使用無DNase無RNase的吸頭和離心管，防止RNA降解，常更換吸頭，防止交叉污染。
4. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液PP置于65℃水浴后再使用。
5. 根據(jù)后續(xù)試驗需求，請使用DNase I（貨號QR0102）進(jìn)行基因組清除。
常見問題解析
問題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
RNA吸附柱 堵塞 | （1）上樣量太高 （2）加入RNA吸附柱的液體中有固體成分或沉淀物 | （1）減少上樣量。 （2）增加離心時間。 （3）切勿吸取到可見固體成分。 （4）再次離心。 |
RNA得率低 | （1）未離心下來 （2）樣本量太大，裂解不充分 | （1）減少樣本量。 （2）重復(fù)洗脫步驟一次。 |
RNA降解 | （1）樣本不新鮮 （2）RNA酶污染 | （1）使用新鮮樣本。 （2）使用保存在樣品保存液中樣本。 （3）樣本保存在-80℃甚至液氮中，盡可能現(xiàn)取現(xiàn)用。 （4）常更換手套。 （5）常更換吸頭和離心管。 （6）使用無DNase無RNase的吸頭和離心管。 |
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