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IBV M41 serotype HI antigen 傳染性支氣管炎HI抗原
荷蘭GD公司生產(chǎn)的禽傳染性支氣管炎血凝抑制試驗(yàn)用抗原

荷蘭GD公司，華南地區(qū)總代理

廣州測(cè)迪生物

楊

用于雞傳染性支氣管炎病毒（M41株）滅活疫苗血清學(xué)效力檢驗(yàn)及免疫監(jiān)測(cè)。 

用法與判定】 
1  材料 
1.1  96孔V型微量反應(yīng)板、單道及多道微量移液器、吸頭、加樣容器、吸管、燒杯等。 
1.2  HA緩沖液  將5.96g HEPES、8.19g氯化鈉、0.15g氯化鈣依次溶解于1000ml雙蒸水中，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)至pH值6.5，用0.2?m微孔濾器濾過(guò)，分裝，置2～8℃保存?zhèn)溆谩?nbsp;
1.3  生理鹽水  取9g氯化鈉溶解于1000ml蒸餾水中，即成。
1.4  1%雞紅細(xì)胞懸液  采集公雞血液（加入阿氏液抗凝），加入生理鹽水，離心，洗滌5次，zui后用HA緩沖液將血球泥稀釋至1%（V/V）。 
1.5  25%高嶺土懸液  取高嶺土25g，加水至100ml，再加入0.1mol/L鹽酸溶液 250ml，搖勻，靜置60分鐘，棄上清，用去離子水反復(fù)洗滌至中性，置37℃，直至水份*蒸發(fā)，用pH值7.2 PBS（0.01mol/L）配成25%懸液，置2～8℃保存?zhèn)溆谩?nbsp;
1.6  抗原溶解  將凍存的抗原溶解后搖勻，待測(cè)HA。 

2  操作術(shù)式 
2.1  IB HI抗原HA試驗(yàn)操作方法 
2.1.1  在96孔微量板上，從第1孔至第12孔，用加液器每孔加入HA緩沖液25?l。 
2.1.2  取25?l HI抗原，從第1孔起，依次作2倍系列稀釋至第12孔，混合，棄去25?l。 
2.1.3  每孔加入25?l HA緩沖液。 
2.1.4  每孔加入25?l 1%雞紅細(xì)胞懸液，每塊板上設(shè)稀釋液和紅細(xì)胞懸液對(duì)照孔。 
2.1.5  將微量板置振蕩器上振蕩30秒，置2～8℃作用45分鐘，判定結(jié)果。 
2.1.6  結(jié)果判定  將微量板傾斜45度。對(duì)照孔的紅細(xì)胞應(yīng)*沉淀到孔底中心，呈淚珠樣流淌，HA陽(yáng)性孔的紅細(xì)胞則均勻分布于孔底或呈鋸齒樣凝集。使紅細(xì)胞*凝集的zui大稀釋倍數(shù)為該抗原的HA效價(jià)。 
2.2  IB HI工作抗原的配制  如果IB HI抗原凝集價(jià)測(cè)定結(jié)果為1:256（舉例），則4個(gè)HA單位為1:64（256÷4=64），這時(shí)可將HI抗原用HA緩沖液稀釋64倍，即成4 HA單位的工作抗原液。 
2.3  IB HI試驗(yàn)操作方法 
2.3.1  待檢血清的處理  取0.1ml血清，加入0.3ml 25%高嶺土懸液，混勻，置37℃ 60分鐘，以6000r/min離心15分鐘，取上清，即為1:4稀釋的待檢血清。 
2.3.2  HI試驗(yàn)操作方法 
2.3.2.1  在96孔微量板上，每行從第2孔開(kāi)始，每孔加入25?l HA緩沖液，直至第12孔。 
2.3.2.2  分別在第1、2、12孔中加入處理過(guò)的待檢血清25?l。 
2.3.2.3  用加樣器從第2孔起作2倍系列稀釋?zhuān)敝恋?0孔（血清稀釋倍數(shù)從第1孔的1:4、第2孔的1:8……至第10孔的1:2048），棄去25?l。 
2.3.2.4  向第1～11孔中加入25?l 4 HA單位的抗原，在微量振蕩器上振蕩30秒，室溫下作用30分鐘。 
2.3.2.5  每孔加入25?l紅細(xì)胞懸液，振蕩30秒，放2～8℃下反應(yīng)30～45分鐘，判定結(jié)果。 
2.3.3  判定  判定時(shí)將微量板傾斜45度。只有當(dāng)抗原對(duì)照孔（第11孔）中紅細(xì)胞*凝集、血清對(duì)照孔（第12孔）中的紅細(xì)胞*沉淀時(shí)，當(dāng)陰性血清HI抗體效價(jià)不高于1:8、陽(yáng)性血清HI抗體效價(jià)與已知效價(jià)相比誤差不高于1個(gè)滴度時(shí)，試驗(yàn)方為成立。若紅細(xì)胞沉淀呈淚珠樣流淌，判為HI陽(yáng)性；若紅細(xì)胞在孔底均勻分布或呈鋸齒狀凝集，判為HI陰性。以*抑制紅細(xì)胞凝集的zui高血清稀釋倍數(shù)作為待檢血清的HI抗體效價(jià)