美國耐潔Nalgene 細(xì)胞凍存程序降溫盒 梯度降溫盒 細(xì)胞復(fù)蘇工具 5100-0001介紹：

       貨號：5100-0001

       用途：細(xì)胞凍存、細(xì)胞復(fù)蘇

       可放凍存管：1ml、1.2ml、1.5ml、2ml

      附：梯度降溫盒使用常見問題（程序降溫盒使用小經(jīng)驗），程序降溫盒異丙醇使用經(jīng)驗    聚碳酸脂（PC）盒體，藍(lán)色高密度聚乙烯（HDPE）蓋，白色高密度聚乙烯（HDPE）管槽，泡沫襯墊。可實現(xiàn)每分鐘1℃降溫，大大提高凍存細(xì)胞的存活率，從冰箱拿出來后，泡沫內(nèi)襯及異丙醇也可保證逐步升溫，故也可用于細(xì)胞復(fù)蘇。用之前在盒夾層內(nèi)注入100%濃度的異丙醇，管槽可放置1-2ml凍存管或儲液管18個，同時管槽支架可防止管子與酒精接觸，以防由于毛細(xì)作用而造成污染，或弄掉標(biāo)簽。

細(xì)胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降溫方法是利用程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃，zui后再放置到液氮槽中長期保存。程序降溫盒的使用注意事項如下：

實驗室雖然有程序降溫凍存盒，但怎么使用一直都搞不明白，我覺得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細(xì)胞剛開始還沒凍的時候就是室溫)，然后把細(xì)胞放進(jìn)去，再一起移到-80度，這樣才能實現(xiàn)程序降溫呢? 時間使用長了，感覺里面的液體是不是異丙醇啊，使用時間長了會不會揮發(fā)或變質(zhì)什么的，要不要添加或維護(hù)一下呢，還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分，要補(bǔ)充嗎?

美國耐潔Nalgene 細(xì)胞凍存程序降溫盒 梯度降溫盒 細(xì)胞復(fù)蘇工具 5100-0001經(jīng)驗分享：

經(jīng)驗1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于zui底線。凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進(jìn)去細(xì)胞，置于-80，利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的，但是我一直沒換過，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。

經(jīng)驗2：我們實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便，效果也不錯的。

經(jīng)驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!

經(jīng)驗4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因為梯度降溫的起始點(diǎn)是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達(dá)到刻度線，否則降溫效果會受到影響。

經(jīng)驗5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細(xì)胞有毒性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細(xì)胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。

程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇。