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近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，基于核酸檢測的診斷方法已大量建立并廣泛應(yīng)用于人類疾病的實(shí)驗(yàn)室檢測中。與其他的核酸擴(kuò)增技術(shù)相比，等溫擴(kuò)增有快速、高效、特異的優(yōu)點(diǎn)且無需專用的設(shè)備，所以它一經(jīng)出現(xiàn)就被許多學(xué)者認(rèn)為是一種有可能與PCR媲美的檢測方法。
因此，相信恒溫擴(kuò)增技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷儀器和試劑盒的開發(fā)和應(yīng)用將會是未來分子診斷POCT的一個新方向。
主流恒溫擴(kuò)增技術(shù)原理介紹
1、LAMP環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)
原理：環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（loop mediated isothermal amplification,LAMP）使用具有鏈置換特性的Bst DNA聚合酶，針對靶基因的6個區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物，在等溫條件下高效、快速、特異性擴(kuò)增靶標(biāo)序列，可在60-65℃進(jìn)行恒溫擴(kuò)增，15-60分鐘左右即可實(shí)現(xiàn)109～1010倍的核酸擴(kuò)增。
優(yōu)勢及應(yīng)用：等溫擴(kuò)增因其反應(yīng)快速、特異高、設(shè)備簡單易操作、結(jié)果易于鑒定等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測等領(lǐng)域，并且還將廣泛應(yīng)用于臨床傳染病診斷、環(huán)境監(jiān)測、食品安全等領(lǐng)域，已經(jīng)成為一種適用于分子POCT平臺的理想方法。
分類：LAMP檢測方法分為多種，包括比濁法、pH顯色法、熒光染料法（如NHB、鈣黃綠素、SYBR Green、Syto等）、熒光探針法等。
2、RPA重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)
原理：重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件，主要依賴于重組酶、Bsu酶和SSB蛋白?？梢栽?7~42 ℃條件下，10~30 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)待測靶標(biāo)的快速檢測。
優(yōu)勢及應(yīng)用：它具有反應(yīng)靈敏度高、特異性強(qiáng)、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于基層和現(xiàn)場即時檢測，可廣泛應(yīng)用于體外診斷、動物疫病、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。
分類：RPA檢測方法分為多種，包括電泳法、EXO探針法、Fpg探針法、測流層析試紙條（LF-RPA）以及絮凝分析檢測等。
部分產(chǎn)品性能展示
01 pH顯色法RT-LAMP試劑
pH顯色法RT-LAMP是將可視染料作為敏感指示劑，在60-65℃等溫條件下，利用恒溫水浴鍋或普通PCR儀完成一步法RNA核酸擴(kuò)增。30min即可通過反應(yīng)后顏色的變化，判斷是否感染病原體，結(jié)果更直觀（陽性為橙黃色，陰性為洋紅色）。該方法適用于大批量人群的快速檢測。
推薦產(chǎn)品：
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit（13906ES）
RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit（13920）（可凍干版）
性能展示：
02 熒光染料法RT-LAMP試劑
熒光染料法RT-LAMP是將熒光染料（如SYBR Green、Syto等）作為熒光標(biāo)記物，在擴(kuò)增反應(yīng)中與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光信號會增強(qiáng)800-1000倍。使用熒光定量PCR儀在60-65℃恒溫條件下進(jìn)行測試，約30min后即可通過擴(kuò)增結(jié)果判斷是否感染病原體，還可搭配微流控芯片或便攜式檢測儀快速檢測。
推薦產(chǎn)品：RT-LAMP Dye Assay Kit（UDGplus）（13762ES）
性能展示：
RT-LAMP/RPA mix選擇指南
產(chǎn)品分類 | RT-LAMP mix | RPA mix | ||
產(chǎn)品名稱 | RT-LAMP Dye Assay Kit(UDG plus) | RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit | RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit | Quick Fuse Amplifier |
產(chǎn)品貨號 | 13762ES | 13906ES | 13920ES | 16702ES |
產(chǎn)品類別 | 熒光染料法 | pH顯色法 | pH顯色法 | 探針法 |
產(chǎn)品組份 | 2組份 Buffer、酶mix | 3組份 Buffer、RT酶、Bst酶 | 4組份 Buffer、RT酶、 Bst酶、凍干保護(hù)劑 | 4組份 Buffer、酶mix、 醋酸鎂 |
支持凍干 | 否 | 支持，不含凍干保護(hù)劑 | 支持，含凍干保護(hù)劑 | 不支持 |
LAMP/RT-LAMP原酶選擇指南
產(chǎn)品分類 | Bst酶 | 逆轉(zhuǎn)錄酶 | UDG酶 | |||
產(chǎn)品名稱 | Bst Plus | Lyophilized Bst Plus | Ⅲ Reverse Transcriptase | III Reverse Transcriptase, Glycerol-free | UDG | UDG,Glycerol-Free |
產(chǎn)品貨號 | 14402ES | 14405ES | 11111ES | 11297ES | 14455ES | 14001ES |
酶活濃度 | 40 U/μL | 60 U/μL | 200 U/μL | 600 U/μL | 1 U/μL | 1 U/μL |
產(chǎn)品組份 | 3組份 Buffer、酶、硫酸鎂 | 2組份 Bst凍干粉、復(fù)溶液 | 2組份 Buffer、酶 | 單組份 | 單組份 | 單組份 |
支持凍干 | 否 | 是 | 否 | 是 | 否 | 是 |
RPA原酶選擇指南
產(chǎn)品分類 | Bsu聚合酶 | 重組酶 | 重組蛋白 | 單鏈結(jié)合蛋白 | 肌酸激酶 | 核酸外切酶 |
產(chǎn)品名稱 | Bsu | T4 UvsX | T4 UvsY | gp 32 | Creatine Kinase | Exonuclease III |
產(chǎn)品貨號 | 11078ES | 11079ES | 11080ES | 11081ES | 14502ES | 14525ES |
酶活濃度 | 5 U/μL | 2 μg/μL | 2 μg/μL | 5 μg/μL | 2 μg/μL | 100 U/μL |
產(chǎn)品組份 | 單組份 | 單組份 | 單組份 | 單組份 | 單組份 | 2組份 Buffer、酶 |
支持凍干 | 否 | 否 | 否 | 否 | 否 | 否 |
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