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D-熒光素原理D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體
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轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）------無血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物背景介紹轉(zhuǎn)鐵蛋白又名運(yùn)鐵蛋白（Transferrin，TRF、Tf），負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵。以三價(jià)鐵復(fù)合物（Tf-Fe3+）的形式進(jìn)入骨髓中，供成熟紅細(xì)胞的生成。轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中，血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白供應(yīng)機(jī)體絕大部分組織的鐵，而在其不能到達(dá)的部位，由這些組織自己合成的轉(zhuǎn)鐵蛋白在局部產(chǎn)生轉(zhuǎn)鐵作用。圖1:轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)構(gòu)人轉(zhuǎn)鐵蛋白（HumanTransferrin）主要在肝臟合成，是由位于同源N-端和C-端
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免疫球蛋白G（IgG）——模擬抗體活性，神似抗體結(jié)構(gòu)免疫球蛋白免疫球蛋白（Ig）指具有抗體（Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)，與抗體分子相似的球蛋白。免疫球蛋白是由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈通過鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。圖1五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖IgG簡(jiǎn)介免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG，IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總
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qPCR常見問題及解決方案對(duì)于從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)猿來說，RT-qPCR實(shí)驗(yàn)可謂是老生常談了?？此骑L(fēng)平浪靜，只需“RNA提取-反轉(zhuǎn)錄-熒光定量”這些按部就班的操作，實(shí)則險(xiǎn)象環(huán)生，一丁點(diǎn)的出錯(cuò)都有可能讓我們懷疑人生。即便如此，在CNS的召喚下我們?nèi)耘f一遍遍的重復(fù)、重復(fù)、再重復(fù)。小翊深有體會(huì)，為此嘔心瀝血整理出來常用的SYBRGreen染料法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)常見問題，并給出了可能的原因和解決方案，希望大家能夠順利度過RT-qPCR大關(guān)。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中，大家或多或少會(huì)遇到擴(kuò)增曲線異常
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抗體親和純化系列產(chǎn)品概述ProteinA、ProteinG是常應(yīng)用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白。將ProteinA、G分別固定在不同的介質(zhì)上，或同時(shí)將ProteinA、G共價(jià)偶聯(lián)到介質(zhì)表面，是從腹水、細(xì)胞培養(yǎng)物上清和血清中分離IgG和IgG亞家族的有效工具。ProteinL源于細(xì)菌，能更廣泛地結(jié)合各種類型以及亞類的免疫球蛋白，包括所有類型的IgG和單鏈可變區(qū)(ScFv)以及Fab片段。該蛋白只與抗體的kappa鏈結(jié)合而不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，這一特性使其與蛋白A或蛋白G相比，能更廣泛地結(jié)合
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Hifair Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR （gDNA digester plus）
Hifair®Ⅲ1stStrandcDNASynthesisSuperMixforqPCR(gDNAdigesterplus)——Yeasen第三代逆轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混液，高質(zhì)量cDNA的*！研發(fā)背景RT-qPCR是一個(gè)多步驟連貫實(shí)驗(yàn)，逆轉(zhuǎn)錄的實(shí)驗(yàn)結(jié)果只能通過后續(xù)qPCR進(jìn)行判定，因此這一過程的成功與否十分關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)過程中，你是否有遇到過這些問題？1.逆轉(zhuǎn)錄效率低導(dǎo)致后續(xù)qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值偏大？2.RNA具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或GC含量高導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄失?。?.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品組分多，加樣麻煩誤差還大？。。。。。。 -
【干貨+試用】一文get核酸片段化酶知識(shí)要點(diǎn)近小翊在后臺(tái)收到一封留言，說建庫的片段化儀器壞了，不能做超聲打斷，問有沒有其他核酸打斷的方法推薦。核酸打斷的方法可以分為機(jī)器法和試劑法。其中機(jī)器法包含接觸式和非接觸式，接觸式主要包括探頭式和水浴超聲兩大類，這類方法比較實(shí)惠，但是直接接觸樣本會(huì)導(dǎo)致樣本損耗和污染，非接觸式主要包括Diagennode和Covaris這兩個(gè)品牌，這類儀器和耗材的成本太高，單個(gè)樣本的耗材成本達(dá)20-50元。試劑法指的是采用片段化酶對(duì)核酸進(jìn)行打斷，這類方法成本較低，操作簡(jiǎn)便省時(shí)
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搞事情，翊圣請(qǐng)來了四位ECL超級(jí)魔術(shù)師？
搞事情啊，翊圣請(qǐng)來了四位ECL超級(jí)魔術(shù)師？？老板，都說你家ECL功能強(qiáng)，我給個(gè)飛克級(jí)的蛋白，能變出條帶嗎？辦不到？？老板，我多給點(diǎn)小費(fèi)，把蛋白提高到皮克級(jí)，能不能變出條帶？還是辦不到？？那也太差勁了，還想不想混了！不，小伙，你理解錯(cuò)了，是通通不是問題！！跟著我往下看！點(diǎn)亮您的印跡膜，一觸即發(fā)ECL試劑，即化學(xué)發(fā)光法辣根過氧化物酶（HRP）底物，是目前Westernblotting檢測(cè)中為靈敏的試劑。目前市場(chǎng)上普通ECL試劑在使用過程中經(jīng)常出現(xiàn)易淬滅、高背景、不穩(wěn)定以及低豐度蛋白難以檢測(cè)等問題，影
