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上新 | 熱穩(wěn)定、低宿主殘留的RNase HII來咯！
圖1. RNase HII反應(yīng)原理示意圖
RNase HII應(yīng)用
依賴于Rnase HII的PCR (rhPCR)
rhPCR引物是在高度保守的目標(biāo)寡核苷酸序列區(qū)域內(nèi)插入1段RNA堿基序列，形成DNA-RNA-DNA的堿基序列，并且該引物的3'-末端被化學(xué)基團(tuán)封阻，該引物未切割時(shí)無法正常延伸。Rnase HII可以特異性地水解DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈中的RNA，但不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵。因此只有當(dāng)封閉引物與靶DNA互補(bǔ)時(shí)，Rnase HII才能使DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈在RNA堿基的5'-側(cè)發(fā)生裂解，留下具有3'-羥基的DNA寡核苷酸，該3'-羥基DNA寡核苷酸能夠起到引物的作用，從而允許引物延伸。rhPCR利用Rnase HII的特異性作用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈的特異水解，從而實(shí)現(xiàn)引物的準(zhǔn)確延伸，提升了反應(yīng)的特異性。
圖2. rhPCR原理圖[1]
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)
將RNase HII應(yīng)用于LAMP擴(kuò)增體系后，能有效解決LAMP技術(shù)的假陽性問題，為L(zhǎng)AMP技術(shù)更加廣泛的應(yīng)用于臨床診斷。如圖3所示，利用Rnase HII引物激活的LAMP方法(PA-LAMP)，當(dāng)引物與靶ssDNA配對(duì)時(shí)，Rnase HII酶特異性切割引物上的RNA，激活引物，從而允許引物延伸，實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增，有效減少體系中的假陽性。
圖3. PA-LAMP原理示意圖[2]
翌圣RNase HⅡ
部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
E. coli基因組DNA殘留< 0.01copies/1 U
圖4. E. coli基因組DNA殘留檢測(cè)
95℃耐熱性測(cè)試
對(duì)RNase H II (Cat#14539ES)進(jìn)行95℃加熱0~45 min后，測(cè)試RNase HII的酶活結(jié)果，結(jié)果表明翌圣RNase HII加熱45 min后，酶活幾乎沒有損失。
圖5. 95℃耐熱測(cè)試
無核酸外切酶、切口酶、RNase殘留
圖6. 核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測(cè)結(jié)果
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