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點突變試劑盒/QuikChange突變試劑盒系列

2016-2-18  閱讀(661)

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點突變試劑盒/QuikChange突變試劑盒系列

輕松實現(xiàn)準確可靠的定點突
當天即可完成的簡單實驗方案,節(jié)省您的時間。QuikChange突變試劑盒采用了我們*的、一天內(nèi)即可完成的三步法,可在幾乎任何雙鏈質(zhì)粒模板中引入點突變、氨基酸替換、缺失突變和小插入突變,并且突變效率超過80%。這種簡單的三步法首先使用熱循環(huán)儀合成突變鏈,然后使用DpnI 降解親本DNA 模板,zui后通過轉(zhuǎn)化步驟完成實驗(圖1)。該方法無需耗時的亞克隆、單鏈DNA 拯救或體外甲基化步驟。
減少不必要的錯誤
在PCR 反應過程中,錯誤往往隨著每輪擴 增循 環(huán) 而 逐 步 增 加 , 與 此 不 同 ,QuikChange方法采用了線性擴增策略,只能以親本DNA作為模板進行擴增。由于循環(huán)次數(shù)少而模板起始量相對較高,因此可以確保以zui少的錯配進行穩(wěn)定的線性擴增。為了保證只有親本鏈被復制,設(shè)計了可與親本鏈*匹配的互補引物。使用DpnI 酶處理擴增產(chǎn)物,以消化dam 甲基化和半甲基化的親本鏈。這種非PCR 方法結(jié)合市場上保真度zui高的聚合酶,幾乎可*消除不需要的第二位點突變。

經(jīng)過優(yōu)化的試劑確保實驗成
QuikChange 試劑盒包含所有必需試劑(包括對照),因此您什么都不缺。酶、緩沖液和dNTP經(jīng)過優(yōu)化,可節(jié)省時間并保持結(jié)果一致性。此外,我們所有試劑盒都包含Dpn I 酶和的感受態(tài)細胞。
引物設(shè)計更加容易
QuikChange 引物設(shè)計程序可幫助您設(shè)計突變引物,以進行QuikChange 定點突變實驗。
• 設(shè)計生成適用于點突變、缺失突變和插入突變的引物序列,設(shè)定*的解鏈溫度和自由能
• 為多位點突變和飽和突變提供建議
• 將導入的DNA 序列翻譯為氨基酸序列
• 支持我們所有QuikChange 定點突變試劑盒
定點突變領(lǐng)域的創(chuàng)新技
QuikChange Lightning定點突變試劑盒:功能強大的新工具在三小時內(nèi)即可引入點突變、插入突變或缺失突變,隨后便可進行隔夜轉(zhuǎn)化,同時保持了QuikChange 試劑盒預期所能
達到的高準確性和率(圖2)。由于采用了我們*的三步QuikChange實驗方案及催化速度更快的酶,擴增和篩選步驟所需時間得到了縮短。這些新型酶類僅為我們的QuikChange Lightning 定點突變試劑盒所*。


增強的持續(xù)合成能力可減少篩選時間
我們的QuikChange Lightning DNA聚合酶融合蛋白是配方,能夠以超高的保真度在更短的時間內(nèi)延伸突變引物。我們的QuikChange Lightning DNA融合型聚合酶具有增強的持續(xù)合成能力,極為準確和,并能擴增長片段靶序列,同時大幅減少延伸時間。•QuikChange LightningDNA 聚合酶融合蛋白具有更快的延伸時間(30 秒/kb)•Dpn I限制性內(nèi)切酶經(jīng)強化,只需5分鐘即可消化親本質(zhì)粒DNA,為您節(jié)省多達55 分鐘的時間
適合大片段質(zhì)粒
使用高保真酶來擴增長片段靶序列非常關(guān)鍵,因為突變頻率隨擴增子的增大而線性增大。該試劑盒適合富含G/C 的復雜質(zhì)粒和/或長達14 kb的大片段質(zhì)粒。我們的新型QuikChange Lightning 試劑盒包含我們的QuikSolution 試劑,可促進大片段質(zhì)粒的復制。
• 我們的XL-10 Gold® 超級感受態(tài)細胞提高了轉(zhuǎn)化過程中DNA 的轉(zhuǎn)化效率
輕松進行結(jié)構(gòu)域交換
通過結(jié)構(gòu)域交換實驗可在相關(guān)基因序列之間交換區(qū)域,從而繪制同源蛋白質(zhì)之間的功能差異圖譜。按照常規(guī)作法,這些實驗通常難度大,耗時多,因為實驗中要生成含尿嘧啶的ssDNA1或者依賴方便的限制性酶切位點2。與之相比,使用經(jīng)過改進的新型QuikChange試劑盒可快速輕松地進行DNA 序列3交換(圖3)。插入與缺失突變的理想之選通過插入與缺失突變研究能夠繪制基因的獨立功能區(qū)圖譜、改造載體、引入親和標簽以及糾正移碼突變。我們使用QuikChange方法進行小片段插入和缺失(zui多12 bp),可觀察到高于80% 的突變效率4。公司外部的許多其他研究者使用QuikChange方法或其改進方法可以引入31 bp5、87 bp6 和3 kb的缺失或者31 bp以及高達約1 kb的插入片段。同結(jié)構(gòu)域交換實驗一樣,這些QuikChange試劑盒改良方法簡單且,可用任何質(zhì)粒DNA 模板zui大限度地實現(xiàn)多種功能研究。Qcbio公司提供,切勿拷貝。


QuikChange II 定點突變試劑盒:成熟的技術(shù)
使用我們QuikChange II試劑盒,可以實現(xiàn)且準確的定點突變,該試劑盒特點在于包含經(jīng)由基因工程改造而來,具有增強地糾錯功能的PfuUltra DNA 聚合酶d。
QuikChange II XL:應對條件挑戰(zhàn)的應用
我們的QuikChange II XL 定點突變試劑盒a 專為大片段質(zhì)粒模板或者其它難突變質(zhì)粒模板的突變而設(shè)計。QuikChange IIXL試劑盒的特點在于其試劑成分專門設(shè)計用于提高DNA 復制和增強細菌轉(zhuǎn)化效率。前塵提供,切勿拷貝。
•QuikSolution 試劑可促進大片段質(zhì)粒復制
• 與原有QuikChange 試劑盒采用的XL1-Blue® 細胞相比,XL-10 Gold 超級感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化率是前者的5 倍。
QuikChange II-E:實現(xiàn)zui高的電穿孔轉(zhuǎn)化效率
我們的QuikChange II-E 定點突變試劑盒f專為那些需要將分離的突變克隆轉(zhuǎn)化進電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的研究者設(shè)計。該試劑盒包含我們的XL1-Blue 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞,該感受態(tài)細胞具有四環(huán)素抗性并且具有*的電轉(zhuǎn)化效率。
 

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