脂多糖(LPS)提取試劑盒
產(chǎn)品信息:(現(xiàn)貨供應(yīng))
產(chǎn)地 | 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝 | *(元) |
iNtRON | 17141 | LPS extraction kit | 100次 | 1500.00 |
試劑盒組成
組分 | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存方法 |
1 | Lysis Buffer | 1x 100 ml | 2~8℃ |
2 | Purification Buffer | 1x 80ml | 2~8℃ |
LPS背景描述:
◆ 脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分,結(jié)構(gòu)很復(fù)雜、熱穩(wěn)定性*(在250℃下干熱滅菌2h才*滅活)。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因,如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素(endotoxin)。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成,不同細(xì)菌間的多糖鏈?zhǔn)歉叨茸兓?,決定細(xì)菌的血清型;而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動(dòng),包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過(guò)檢測(cè)LPS的存在來(lái)診斷腦膜炎。
◆ 正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系,生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究,如闡明LPS的結(jié)構(gòu),代謝,免疫學(xué),生理學(xué),毒性,生物合成途徑;誘導(dǎo)生長(zhǎng)促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌;誘導(dǎo)疾病研究的動(dòng)物模型如炎癥反應(yīng),急性肺損傷,
產(chǎn)品描述:
◆ 常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的熱酚-水法(hot phenol-water method),主要優(yōu)勢(shì)在于高產(chǎn)量,但是提取步驟繁瑣,費(fèi)時(shí),以及常受蛋白質(zhì)和核酸的污染,純度低等缺點(diǎn)也常困擾科研工作者。
◆ iNtRON提供的LPS提取試劑盒是市場(chǎng)上的*個(gè)商品化的產(chǎn)品,排除傳統(tǒng)熱酚-水法的缺陷,使得科研工作者能夠快速方便的從細(xì)菌中提取LPS。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì):
∷適用性廣,能從所有G-菌中提取LPS(見(jiàn)Fig. 2);
∷操作時(shí)間短(包括裂解在內(nèi),60min內(nèi)即可完成);操作簡(jiǎn)單方便;
∷少量細(xì)菌即可獲得足夠的LPS;LPS產(chǎn)量與細(xì)菌培養(yǎng)物成正比,一般使用3~5ml培養(yǎng)物LPS產(chǎn)量zui高;細(xì)菌*培養(yǎng)體積1~2ml(OD600=0.8-1.2)
∷LPS產(chǎn)率高,且重復(fù)性好(見(jiàn)Fig.1);
∷提取LPS下游應(yīng)用廣,包括直接用于免疫刺激;
操作步驟:
1)室溫離心收獲細(xì)菌細(xì)胞,13,000rpm,30sec。
2)加入1ml裂解緩沖液(Lysis Buffer),劇烈渦旋混勻。
3)加入200μl氯仿,劇烈渦旋混勻10-20 sec,室溫孵育5min。
4)4℃,13,000rpm離心10min,轉(zhuǎn)移400μl上清到新1.5ml離心管中。
5)加入800μl純化裂解液(Purification Buffer),并混勻。-20℃孵育10min。
6)4℃,13,000rpm離心15min。
7)用1ml 70%EtOH洗滌LPS顆粒,并*干燥。
8)在LPS中加入70μl Tris-HCL(10mM,pH8.0),并超聲。
應(yīng)用文獻(xiàn):
1)YanH.L, et al.DNA Sequencing and Identification of Serogroup-Specific Genes in the Escherichia coli O118 O Antigen Gene Cluster and Demonstration of Antigenic Diversity But Only Minor Variation in DNA Sequence of the O Antigen Clusters of E. coli O118 and O151. Foodborne Pathogens and Disease. 5(4): 449-457(2008).
2) HA Shui, et al. LPS-evoked IL-18 expression in mesangial cells plays a role in accelerating lupus nephritis. Rheumatology 46:1277–1284(2007).
3) R Bucki, et al..Release of the antimicrobial peptide LL-37 from DNA/F-actin bundles in cystic fibrosis sputum. European Respiratory Journal 29:624-632 (2007).
4) BH.Kim, et al. Effect of retinoids on LPS-induced COX-2 expression and COX-2 associated PGE2 release from mouse peritoneal macrophages and TNF-α release from rat peripheral blood mononuclear cells. Toxicology Letters 150(2):191-201(2004).
5) Anat Lerner, et al. The Azospirillum brasilense Sp7 noeJ and noeL genes are involved in extracellular polysaccharide biosynthesis. Microbiology 155: 4058–4068(2009).
6) Chitrita DebRoy, et al. Multiplex Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Nonserotypable Shiga Toxin–Producing Escherichia coli Strains of Serogroup O147. Foodborne Pathogens and Disease 7(11): 1407-1414(2010).