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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40125ES10 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè) |
產品介紹
HB180209
Collagen, Type I , from rat tail鼠尾膠原蛋白I
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格 |
Collagen I 鼠尾膠原蛋白I | 40125ES10 | 10 mg | 4℃ | 586.00 |
40125ES50 | 50 mg | 4℃ | 2236.00 |
產品描述
膠原蛋白（Collagen）是結締組織和內臟器官外基質的主要成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布。膠原蛋白在結構和遺傳學上被分為不同類型，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結構上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成300nm長的異源多聚體。當用作凝膠時，膠原蛋白有助于體外培養(yǎng)并增強細胞特異性形態(tài)和功能的表達。膠原蛋白也可用于薄層以促進附著，應用包括研究腫瘤細胞侵襲和遷移，單核細胞，巨噬細胞的培養(yǎng)或分化研究，以及粒細胞和巨噬細胞的放射自顯影研究。膠原I還用于維持肝細胞功能，分化狀態(tài)和肝細胞基因轉錄水平的升高等研究。
Collagen I 鼠尾膠原蛋白I，本品是來源與鼠尾，溶于0.02M HAc溶液，濃度為3~4mg/mL，通過SDS-PAGE測定純度大于90 %，無菌。
運輸和保存方法
冰袋運輸。4℃保存，有效期1年。不可凍存。
注意事項
1） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2） 整個操作請于冰上進行，因室溫下膠原蛋白I可迅速成膠。
3） 整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細胞生長。
使用說明
膠原蛋白I可凝膠到蓋玻片或組織培養(yǎng)皿上或用作細胞附著的薄膜涂層。細胞可在凝膠頂部，凝膠內或凝膠層之間培養(yǎng)。
薄層包被（Thin coating）程序：
【注意】：包被濃度為5-10µg/cm2，推薦濃度可*5µg/cm2。建議根據具體的細胞培養(yǎng)系統(tǒng)進行優(yōu)化。
1）膠原蛋白I用0.02M乙酸稀釋配置50μg/mL工作液，膠原蛋白I不溶于中性pH溶液。
2）以5µg/cm2涂布培養(yǎng)皿，例如：一個35mm的培養(yǎng)皿的表面積約為10cm2，1~2mL的工作液足以覆蓋此皿。
3）室溫孵育1小時。
4）小心吸取剩余溶液，用PBS或無血清培養(yǎng)基洗滌以除去多余乙酸。
5）組織培養(yǎng)皿包被后可立即使用，也可風干，在2-8℃無菌條件下可貯存長達一周。
膠凝程序：
膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠
1）將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上，暫放置一邊。
2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據需要改變，膠原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的蓋玻片。 對于直徑100mm的培養(yǎng)皿，每個加入約6mL; 對于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL，對于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。
3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。
4）在無菌蒸餾水中（35mm培養(yǎng)皿加5mL，60mm培養(yǎng)皿加10mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水，放置在層流罩中過夜。
5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。
備用膠凝程序：
1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1M NaOH
2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的zui終濃度的體積。
3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。
4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。
4.1加入10×PBS（終體積/10）mL
4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）
終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）
_________________________ = 要加入的膠原蛋白量
瓶標簽上具體濃度（見具體批號）
4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1M NaOH
4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：
添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）
4.5混合管中的物質并放入冰中。
4.6加入膠原蛋白I并計算體積，混勻，冰上備用。
5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。
6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。
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