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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
11184ES03實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混液
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 11184ES03 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：3006更新時(shí)間：2022-11-07 14:42:40
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1ML |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 11184ES03 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
價(jià)格（元）
*（元）
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix
實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混液
11184ES03
1 mL
383.00
223.00
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混液
11184ES08
5×1 mL
1653.00
663.00
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混液
11184ES50
10×5 mL
12533.00
6613.00
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混液
11184ES60
20×5 mL
19833.00
12563.00
產(chǎn)品描述
實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混液是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增的預(yù)溶液，具有高靈敏度和高特異性的特點(diǎn)，顏色為藍(lán)色，具有加樣示蹤的作用。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動(dòng)，可以有效抑制樣品準(zhǔn)備過(guò)程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增。同時(shí)配方添加了提升PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因擴(kuò)增的促進(jìn)因子，使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
本產(chǎn)品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye，適用于所有qPCR儀器，無(wú)需在不同的儀器上調(diào)整ROX的濃度，只需在配制反應(yīng)體系時(shí)加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增。
運(yùn)輸和保存方式
冰袋運(yùn)輸。-20℃避光儲(chǔ)存，有效期18個(gè)月。
本品避免反復(fù)凍融。產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存或配制反應(yīng)體系時(shí)需避免強(qiáng)光照射。
注意事項(xiàng)
1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號(hào)：11141ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
2. 解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀，手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。4. 本產(chǎn)品僅作科研用途!
反應(yīng)體系
組分
體積（μL）
體積（μL）
終濃度
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix
25
10
1×
Forward Primer (10 μM)
1
0.4
0.2 μM
Reverse Primer (10 μM)
1
0.4
0.2 μM
模板DNA
X
X
-
無(wú)菌超純水
to 50
to 20
-
【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
a) 引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。
b) 模板濃度：如模板為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的1/10。
c) 模板稀釋：cDNA原液建議5-10倍稀釋，最佳模板加入量以擴(kuò)增得到的Ct值在20-30個(gè)循環(huán)為好。
d) 反應(yīng)體系：推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無(wú)核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
標(biāo)準(zhǔn)程序
循環(huán)步驟
溫度
時(shí)間
循環(huán)數(shù)
預(yù)變性
95℃
2 min
1
變性
95℃
10 sec
40
退火/延伸
60℃
30 sec★
熔解曲線階段
儀器默認(rèn)設(shè)置
1
快速程序
循環(huán)步驟
溫度
時(shí)間
循環(huán)數(shù)
預(yù)變性
95℃
30 sec
1
變性
95℃
3 sec
40
退火/延伸
60℃
20 sec★
熔解曲線階段
儀器默認(rèn)設(shè)置
1
【注】 快速程序適用于絕大多數(shù)基因，個(gè)別復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)基因可嘗試標(biāo)準(zhǔn)程序。
a) 退火溫度和時(shí)間：請(qǐng)根據(jù)引物和目的基因的長(zhǎng)度進(jìn)行調(diào)整。
b) 熒光信號(hào)采集（★）：請(qǐng)按照儀器使用說(shuō)明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置，幾種常見儀器的時(shí)間設(shè)定如下：
20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec：Applied Biosystems 7300
32 sec：Applied Biosystems 7500
c) 熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
結(jié)果分析
定量實(shí)驗(yàn)至少需要三個(gè)生物學(xué)重復(fù)。反應(yīng)結(jié)束后需要確認(rèn)擴(kuò)增曲線及熔解曲線。
1) 擴(kuò)增曲線：標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線為S型。
Ct值落在20-30之間時(shí)，定量分析最準(zhǔn)確；
Ct值小于10，需要將稀釋模板后，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
Ct值介于30-35之間時(shí)，需要提高模板濃度，或者增大反應(yīng)體系的體積，以提高擴(kuò)增效率，保證結(jié)果分析的準(zhǔn)確性；
Ct值大于35時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無(wú)法定量分析基因的表達(dá)量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲線：
熔解曲線單峰，表明反應(yīng)特異性好可以進(jìn)行定量結(jié)果分析；若熔解曲線出現(xiàn)雙峰或者多峰，則不能進(jìn)行定量分析。
熔解曲線出現(xiàn)雙峰，需要通過(guò)DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標(biāo)峰是引物二聚體還是非特異性擴(kuò)增。
如果是引物二聚體，建議降低引物濃度，或者重新設(shè)計(jì)擴(kuò)增效率高的引物。
如果是非特異性擴(kuò)增，請(qǐng)?zhí)岣咄嘶饻囟?，或者重新設(shè)計(jì)更高特異性的引物。
引物設(shè)計(jì)指南
1. 推薦引物長(zhǎng)度25 bp左右。擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度150 bp為佳，可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過(guò)2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
3. 引物堿基分布要均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個(gè)相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個(gè)堿基最好為G或C。
4. 引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。
5. 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對(duì)。避免引物3’端有2個(gè)堿基以上的非特異性互補(bǔ)。
6. 設(shè)計(jì)完成的引物需要進(jìn)行擴(kuò)增效率的檢測(cè)，只有具備相同擴(kuò)增效率的引物才可用于定量比較分析。
適用機(jī)型
ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler;
Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱
貨號(hào)
規(guī)格
*（元）
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) HOT
11141ES60
100T
1383.00
HB210701
