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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會(huì)員·12年
60225EHygromycin B 潮霉素B
| 參考價(jià) | ￥719 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 60225E 型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 1 g | 719元 | 350 件 可售 |
訪問次數(shù)：302更新時(shí)間：2023-09-26 15:43:56
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡介
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Geneticin)，Zeocin和Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
產(chǎn)品信息
貨號 | 60225ES03 / 60225ES10 |
規(guī)格 | 1 g /10 g |
CAS號（CAS NO.） | 31282-04-9 |
分子式（Molecular Fomular） | C20H37N3O13 |
分子量（Molecular Weight） | 527.52 g/mol |
純度（Purity） | ＞90% by HPLC |
溶解性（Solubility） | 易溶于水 |
活力（Potency） | ≥1050 U/mg |
結(jié)構(gòu)（Structure） |
|
組分信息
組分名稱 | 60225ES03 | 60225ES10 |
規(guī)格 | 1 g | 10 g |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用說明
1. 儲存液的配制（50 mg/mL）
稱取0.5 g 潮霉素B加入10 mL 1×PBS，PH 7.4，充分溶解后用0.22 μm濾器過濾除菌，分裝成單次使用的小量（如1 mL）放到-25~-15℃凍存，1年穩(wěn)定。
2. 常用篩選濃度
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型、培養(yǎng)基、生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500 μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200 μg/mL；真菌300-1000 μg/mL。
3. 殺滅曲線的建立
為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。
1）第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜?！咀ⅰ浚簩τ谛枰呙芏葋頇z測活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2）根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/mL，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
終濃度（μg/mL） | 培養(yǎng)基體積（mL） | 5 mg/mL潮霉素B加入體積（mL） |
50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
3）第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4）接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5）按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
4. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1）轉(zhuǎn)染48 h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。【注】：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。
2）每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3）篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4）挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35 mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5）之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
注意事項(xiàng)
1. 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3. 本產(chǎn)品僅用于科研用途，禁止用于人身上。
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