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免疫熒光單標雙色(雙寬玻片)

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號

品       牌GEMIG

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間:2024-11-15 15:21:03瀏覽次數(shù):1617次

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免疫熒光單標雙色(雙寬玻片)
服務介紹:
免疫熒光單標標記即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理,在一張切片上的一個抗原進行熒光標記,從而實現(xiàn)定位,定性,半定量的分析。

免疫熒光單標雙色(雙寬玻片)

服務介紹:

免疫熒光單標標記即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理,在一張切片上的一個抗原進行熒光標記,從而實現(xiàn)定位,定性,半定量的分析。 

名稱

規(guī)格

免疫熒光單標雙色(雙寬玻片)

 

實驗流程:

1. 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。

2. 抗原修復:組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液(PH8.0)的修復盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復。中火8min?;?min轉(zhuǎn)中低火7min,此過程中應防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。(修復液和修復條件根據(jù)組織來確定)

3. 畫圈:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走)

4. 血清封閉:在圈內(nèi)滴加BSA孵育30min。(一抗若是山羊來源,則加驢血清)

5. 加第一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))

6. 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應種屬標記的按一定比例配好的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

7. DAPI復染細胞核:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。

8. 自發(fā)熒光淬滅:切片稍甩干后,在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min,流水沖洗10min。

9. 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10. 鏡檢拍照:切片置于掃描儀下采集圖像或熒光顯微鏡下拍照。(DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍光;FITC激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm,發(fā)綠光;CY3激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光. CY5激發(fā)波長 608-648nm, 發(fā)射波長672-712。 DAPI染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色,陽性表達為相應熒光素標記的紅光,綠光 。

送樣運輸要求:

1.冰凍切片-20℃保存和運輸

2.石蠟切片常溫運輸至實驗室。

3.細胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡,4℃冰袋保存運輸?shù)綄嶒炇摇?/span>

 

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