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上海信帆生物科技有限公司
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免疫熒光單標(biāo)雙色(切片)

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)

品       牌GEMIG

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2024-11-15 15:14:58瀏覽次數(shù):1195次

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免疫熒光單標(biāo)雙色(切片)
服務(wù)介紹:
免疫熒光單標(biāo)標(biāo)記即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理,在一張切片上的一個(gè)抗原進(jìn)行熒光標(biāo)記,從而實(shí)現(xiàn)定位,定性,半定量的分析。

免疫熒光單標(biāo)雙色(切片)

服務(wù)介紹:

免疫熒光單標(biāo)標(biāo)記即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理,在一張切片上的一個(gè)抗原進(jìn)行熒光標(biāo)記,從而實(shí)現(xiàn)定位,定性,半定量的分析。 

名稱

規(guī)格

免疫熒光單標(biāo)雙色(切片)

 

實(shí)驗(yàn)流程:

1. 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。

2. 抗原修復(fù):組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH8.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中火8min停火8min轉(zhuǎn)中低火7min,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定)

3. 畫圈:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走)

4. 血清封閉:在圈內(nèi)滴加BSA孵育30min。(一抗若是山羊來源,則加驢血清)

5. 加第一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))

6. 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬標(biāo)記的按一定比例配好的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

7. DAPI復(fù)染細(xì)胞核:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。

8. 自發(fā)熒光淬滅:切片稍甩干后,在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min,流水沖洗10min。

9. 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10. 鏡檢拍照:切片置于掃描儀下采集圖像或熒光顯微鏡下拍照。(DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FITC激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm,發(fā)綠光;CY3激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光. CY5激發(fā)波長 608-648nm, 發(fā)射波長672-712。 DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色,陽性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光,綠光 。

送樣運(yùn)輸要求:

1.冰凍切片-20℃保存和運(yùn)輸

2.石蠟切片常溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室。

3.細(xì)胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡,4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。

 



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