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人血管生成素2（Ang-2）ELISA試劑盒

用途：人血管生成素2（Ang-2）ELISA試劑盒用于體外定量檢測(cè)人血清，血漿，緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液中的Ang-2含量,試劑盒可用于檢測(cè)天然和重組的人Ang-2,此試劑盒只用于科研，不能用于診斷。

檢測(cè)原理：

Ang-2試劑盒應(yīng)用的是夾心法固相酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）。Ang-2特異單克隆抗體被包被于微孔板上，已知Ang-2濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的樣品可在此反應(yīng)孔中進(jìn)行檢測(cè)。先將Ang-2抗原和生物素標(biāo)記Ang-2特異單克隆抗體同時(shí)孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶，孵育后洗去未結(jié)合的酶。其后加入底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)，顏色的深淺與樣品中Ang-2的濃度成一定的比例關(guān)系。

試劑盒組成及配制：

自備材料：

蒸餾水；加樣器：10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器

保存條件：

試劑盒保存于2-8度。

1X 洗脫液：配好后，2-8℃，可保存一周。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：配好后，2-8℃，可保存一周。

稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品：稀釋后，立即使用，不易保存。

生物素標(biāo)記抗體：配好后，立即使用，不易保存。

鏈親合素-HRP:配好后，立即使用，不易保存。

樣品收集，處理和保存：

1.       細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

2.       血清——操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

3.       EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測(cè)。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。

4.       如果樣品不直接使用，將其分為小部分（250-500ul）-70℃下保存，避免反復(fù)凍融。

如果可能，不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。

注意：不要在37℃或56℃加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍

檢測(cè)程序

使用前，將所有試劑充分混合，不要使液體產(chǎn)生泡沫。根據(jù)樣品數(shù)量加上空白，標(biāo)準(zhǔn)品決定所需的板條，每個(gè)樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，空白和質(zhì)控都應(yīng)做雙份。

注：制備的生物素標(biāo)記抗Ang-2及親和素-HRP應(yīng)立即使用。

結(jié)果分析

以吸光度為Y軸，相應(yīng)的Ang-2標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的Ang-2含量可根據(jù)其O.D.值由標(biāo)準(zhǔn)曲線推斷出來(lái)。

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