免疫共沉淀

服務目的：

測定兩種目的蛋白質(zhì)是否在細胞內(nèi)結(jié)合；也可用于測定確定某種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
服務原理：

以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。
服務材料：
試劑：蛋白提取試劑盒、非離子變性劑（NP-40、TritonX-100）、PBS、TBS、相應的IgG、Protein A 或Protein G瓊脂糖凝膠珠、SDS-PAGE電泳、上樣緩沖液。
儀器：振蕩器、蛋白電泳儀、恒溫箱、脫色搖床。

服務流程：
1）用其特定蛋白的抗體與ProteinA/G相結(jié)合(Flag IP Kit已結(jié)合上)；
2）用抗體成點特定蛋白，特定蛋白已結(jié)合了與其相互作用蛋白；
3）通過洗滌得到純復合蛋白后用感興趣蛋白抗體通過WB方法檢測其IP結(jié)果；
4）提交WB圖與分析結(jié)果和實驗報告。
服務方法：
1、蛋白樣品準備。收集細胞或組織，在非變性條件下裂解細胞，釋放蛋白。
2、選做去除非特異性結(jié)合。取待測樣品，選用和免疫共沉淀時使用的IgG種屬相同的普通IgG與瓊脂糖凝膠珠混合，4^oC慢搖30min-2h。離心取上清。
3、免疫共沉淀。加一抗，4^oC慢搖過夜。加瓊脂糖凝膠珠，4^oC慢搖1~3h。瞬時離心棄上清。PBS洗沉淀5次。
4、加電泳上樣緩沖液，煮沸用于SDS-PAGE電泳。

收費標準/服務周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

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