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細(xì)胞Hoechst凋亡染色

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更新時(shí)間:2018-10-17 11:28:27瀏覽次數(shù):4345次

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Hoechst是一類DNA染料,與DNA雙鏈中的小溝(minor groove)結(jié)合,可穿過(guò)細(xì)胞膜,可結(jié)合于活細(xì)胞或固定過(guò)的細(xì)胞,因此可用于活細(xì)胞標(biāo)記,可用熒光顯微鏡檢測(cè)形態(tài)學(xué)的細(xì)胞凋亡情況。

服務(wù)簡(jiǎn)介:
Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激發(fā)。都在461nm處發(fā)出藍(lán)靛色熒光光。Hoechst染色時(shí)無(wú)需用DAB來(lái)顯色,它直接結(jié)合細(xì)胞的DNA ,經(jīng)過(guò)紫外光激發(fā)后發(fā)出藍(lán)色熒光。
服務(wù)原理:
Hoechst是可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對(duì)細(xì)胞的毒性較 低。 熒光染料Hoechst能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜,使其染上低藍(lán)色,而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強(qiáng),因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst比正常細(xì)胞的多,熒光強(qiáng)度 要比正常細(xì)胞中要高,此外,凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合,并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不 能有效地將Hoechst排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強(qiáng)。
服務(wù)流程:
1、可貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)于含有蓋玻片的培養(yǎng)皿中,或?qū)⒎琴N壁細(xì)胞懸浮培養(yǎng);
2、將HOECHST加入培養(yǎng)皿,終濃度為10ug/ml,37℃孵育30min;
3、加入4%PF,與培養(yǎng)液1:3混合,固定細(xì)胞5-10min;
4、固定后將長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片用封片劑封于載玻片;
5、熒光顯微鏡下觀察。
客戶提供:
1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存,組織不少于100mg;
2、培養(yǎng)細(xì)胞:通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2×106個(gè)細(xì)胞于EP管,加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,混勻后保存于冰箱(-80℃,避免反復(fù)凍融);
3、血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,保存(-80℃可長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融);
4、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融);
5、石蠟切片,冰凍切片以及細(xì)胞爬片,涂片等。
6、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本
組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后,加冰袋寄送;
細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出);
血清或上清液直接加冰袋寄送(送視路程遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá))。
 
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細(xì)胞Hoechst凋亡染色

Hoechst是一類DNA染料,與DNA雙鏈中的小溝(minor gr

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