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HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)攻略
臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）是臍靜脈的重要構(gòu)成細(xì)胞之一。當(dāng)進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常使用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，而非靜脈內(nèi)皮細(xì)胞或動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。永生化的HUVEC會(huì)通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶RFP基因或GFP基因。
HUVEC細(xì)胞基本信息
| HUVEC細(xì)胞基本信息 | |
| 名稱 | HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞） |
| 形態(tài) | 上皮樣 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
| 接種密度 | 8.0 x 103-3.0 x 104 viable cells/cm2 |
| 傳代比率 | 1:2-1:3 |
圖1 HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）
首先要討論的是HUVEC的“嘴巴刁不刁"？通常來說，HUVEC的“胃口"還是蠻“刁"的，營(yíng)養(yǎng)需求很高，除了營(yíng)養(yǎng)種類豐富的F12和不可少的胎牛血清（如表2所示），肝素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子也是必須的。如圖2所示，長(zhǎng)勢(shì)良好的HUVEC呈鵝卵石樣，輪廓清晰，鋪展均勻，一般2-3天可傳代。
下表為HUVEC精心準(zhǔn)備的“食譜"
| 營(yíng)養(yǎng) | 含量 |
| F12(abs9563) | 0.9 |
| 胎牛血清（abs981） | 0.1 |
| 肝素（abs47014863） | 終濃度0.1mg/ml |
| ECGS血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（ abs04176） | 0.03-0.05mg/ml |
| 雙抗（abs9244） | 0.01 |
圖2 長(zhǎng)勢(shì)良好的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）
其次要討論一下為啥頭天換液，第二天HUVEC無限細(xì)胞系突然出現(xiàn)空泡化？如圖3所示，嚴(yán)重空空泡化的HUVEC。這里要注意的是有限細(xì)胞系的空泡化往往是細(xì)胞凋亡的顯著特征，與細(xì)胞本身狀態(tài)有關(guān)。而無限細(xì)胞系空泡化通常與外界因素有管，有以下兩種可能： 第一點(diǎn)是培養(yǎng)液的pH值與細(xì)胞正常所需pH值差別太大，導(dǎo)致細(xì)胞代謝異常，出現(xiàn)空泡化；第二點(diǎn)是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導(dǎo)致細(xì)胞代謝出現(xiàn)問題，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的情況。
圖3 空泡化的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）
解決細(xì)胞空泡化，通常有兩種方法：1. 測(cè)定完培的pH，看其酸堿性是否適宜。多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍為7.2-7.4。2. 若培基或血清是開封存放很久的，可換用新鮮的完配給細(xì)胞換液；若都是新開封的，可換用新批次的基培或血配制培養(yǎng)液，給細(xì)胞換液觀察。
最后要討論的是如何解決HUVEC聚團(tuán)問題？培養(yǎng)瓶尤其是培養(yǎng)板的親水性較差時(shí)或血清中的促貼壁因子不足時(shí)，會(huì)導(dǎo)致HUVEC細(xì)胞聚團(tuán)問題。解決辦法：培養(yǎng)瓶前一天用明膠（abs47051214)包被可有效預(yù)防HUVEC聚團(tuán)。包被方法：以 T25 培養(yǎng)瓶為例，取5ml的明膠，加入培養(yǎng)瓶， 放置37℃條件下至少30分鐘，然后用槍頭將液體吸出即可。如圖示4所示，是鋪展均勻的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）。
圖4所示，正常貼壁，伸展均勻的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）
本期小愛推薦
?培養(yǎng)簡(jiǎn)單- ?擴(kuò)增效率高 ?維持穩(wěn)定傳代
細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品推薦
| 貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 |
| abs977 | 胎牛血清(特級(jí)) | 500ml |
| abs972 | 胎牛血清(優(yōu)級(jí)) | 500ml |
| abs974 | 胎牛血清(標(biāo)準(zhǔn)級(jí)) | 500ml |
| abs9483 | 高糖DMEM培養(yǎng)基 | 500ml |
| abs9484 | RPMI-1640培養(yǎng)基 | 500ml |
| abs9505 | MEM培養(yǎng)基 | 500ml |
| abs9506 | α-MEM培養(yǎng)基 | 500ml |
| abs9554 | Ham's F-12 | 500ml |
| abs9561 | DMEM/F-12培養(yǎng)基 | 500ml |
| abs961 | 10×PBS緩沖液 | 500ml/500ml×10 |
| abs962 | PBS緩沖液 | 500ml |
| abs970 | D-PBS緩沖液（1×，無鈣鎂） | 500ml |
| abs971 | D-PBS緩沖液(含 Ca2+ Mg2+) | 500ml |
| abs9257 | Hanks平衡鹽溶液(不含Ca2+ Mg2+,無酚紅) | 500ml |
| abs9258 | Hanks平衡鹽溶液(含Ca2+ Mg2+,無酚紅) | 500ml |
| abs47014938 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ，含酚紅 | 100ml |
| abs47047375 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)，不含酚紅 | 100mL |
| abs9479 | 無DMSO無血清細(xì)胞凍存液 | 100mL |
| abs9417 | 無血清細(xì)胞凍存液 | 100mL |
| abs9473 | 細(xì)胞凍存液(含血清) | 100mL |
關(guān)鍵詞：HUVEC、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、空泡化、衰老、聚團(tuán)
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