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報告基因是一類使表達產(chǎn)物易于被檢測的基因,其作用原理是將報告基因的編碼序列及其表達調(diào)控序列與目的基因融合形成嵌合基因,在調(diào)控序列的作用下進行表達,通過對報告基因表達產(chǎn)物的檢測來評價目的基因的表達狀況。常見的報告基因包括螢光素酶(Luciferase)、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、分泌性人胎盤堿性磷酸酶(SEAP)和綠色熒光蛋白(GFP)等。

螢光素酶（Luciferase）是一類在生物體內(nèi)能夠催化熒光素或脂肪醛氧化發(fā)光的酶,從自然界能夠發(fā)光的生物體內(nèi)分離獲得。由于特異性強、靈敏度高、內(nèi)源性低、檢測不受細胞內(nèi)其他物質(zhì)的影響等優(yōu)點,螢光素酶被作為報告基因（標記蛋白）而被廣泛應用。

雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)在單螢光素酶報告基因的基礎上引入了“內(nèi)參對照"報告基因，這樣可以在大程度上減小細胞數(shù)目、細胞生長狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對于實驗的影響，使得實驗結(jié)果更為可信。

本期小愛給大伙帶來一款愛必信爆款雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒：雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60341）。

產(chǎn)品特點：

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。適用于瞬時轉(zhuǎn)染實驗、需要共報告基因建立內(nèi)參或?qū)崿F(xiàn)多重信號、需要報告基因減弱的情況如研究負調(diào)控對刺激產(chǎn)生的細胞反應、實現(xiàn)較高檢測精度等情況。

圖1 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒實驗流程

應用：

雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒是一款應用廣泛的科研工具，現(xiàn)舉例跟大家詳細介紹下常見的螢光素酶報告基因的應用。

應用1：順式作用原件研究

**表示差異極顯著（P<0.01），* 表示差異顯著（P<0.05）

圖2 雞骨形態(tài)生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因不同啟動子截短體報告載體的雙螢光報告結(jié)果

雞骨形態(tài)生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因不同啟動子截短體報告載體的雙螢光報告結(jié)果顯示，BMP15 基因啟動子-153-1 bp 為核心區(qū)域。

應用2：細胞信號通路研究

圖3檢測不同濃度的HLY78系列衍生物對Wnt信號通路報告基因TOPflash的螢光素酶活性影響

通過檢測不同濃度的HLY78系列衍生物對Wnt信號通路報告基因TOPflash的螢光素酶活性影響，篩選出HLY78和HLY119對Wnt信號通路有抑制作用。

應用3：反式作用因子研究

圖4 在-562- -200位點是Runx1 發(fā)揮對Mrgprd 基因的轉(zhuǎn)錄激活的關鍵位點

圖5 Runx1 通過+70 ～ +143 位點序列促進Mrgprd 基因轉(zhuǎn)錄

Runx1（轉(zhuǎn)錄因子）對Mrgprd 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制可能有多種，并非只是通過結(jié)合在Mrgprd 基因上游的結(jié)合位點來直接調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。

應用4：miRNA靶點研究

圖6 miRNA靶點研究案例

miR-1269b過表達可明顯降低293T細胞中METTL3-WT的螢光素酶活性，但對METTL3-MUT的活性沒有顯著影響，表明miR-1269b可靶向METTL3 3’UTR，負調(diào)控GC細胞中METTL3的表達。

注：應用數(shù)據(jù)均來自文獻

實驗數(shù)據(jù)：

圖7 Abisn雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒與市面上同類產(chǎn)品對比結(jié)果

使用愛必信雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60341）與市面上的同類產(chǎn)品進行對比實驗，發(fā)現(xiàn)螢火蟲螢光素酶與海腎螢光素酶比值與國外名品牌同類產(chǎn)品最為接近。

最后，跟大家透漏個好消息：雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60341）本月優(yōu)惠！

本期搭檔產(chǎn)品推薦：

參考文獻：

【1】趙海衛(wèi), 韓佩君, 呂欣, 等. 螢光素酶報告基因在病毒學研究中的應用[J]. 生物技術通訊, 2015, 26(1): 131-134.

【2】Nature chemical biology vol. 9,9 (2013): 579-85. doi:10.1038/nchembio.1309.

【3】高廣亮, 李輝, 王啟貴. 雞肝臟基礎型脂肪酸結(jié)合蛋白基因啟動子活性分析[C]// 中國畜牧獸醫(yī)學會家禽學分會代表會議暨全國家禽學術討論會. 2013.

【4】Kang, Jian , et al. "MicroRNA-1269b inhibits gastric cancer development through regulating methyltransferase-like 3 (METTL3)." Bioengineered 12.1(2021):1150-1160.

【5】劉子敬, 曹誠. 轉(zhuǎn)錄因子Runx1對Mrgprd基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機制研究[J]. 華南國防醫(yī)學雜志, 2020, 34(9):5.