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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)品>>細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒>> CA1310-100線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)

線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)
  • 線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號(hào) CA1310-100
  • 廠(chǎng)商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時(shí)間:2024-08-19 17:18:05瀏覽次數(shù):4981評(píng)價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T
貨號(hào) CA1310 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油
主要用途 可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。
線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)是一種以 JC-1 為熒光探針,快速靈敏地檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位變化的試劑盒,可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)
產(chǎn)品貨號(hào):M8650
產(chǎn)品規(guī)格:100T
產(chǎn)品內(nèi)容:
保存條件:
-20 ℃避光保存,盡量避免反復(fù)凍融,有效期一年。  超純水和 JC-1  染色緩沖液(5 ×)也可 4 ℃保存。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)是一種以 JC-1  為熒光探針,快速靈敏地檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位變化的試劑盒,可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。
JC-1  是一種廣泛用于檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位 Ψm  △ 的理想熒光探針。可以檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位。在線(xiàn)粒體膜電位較高時(shí),JC-1  聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,可以產(chǎn)生紅色熒光;在線(xiàn)粒體膜電位較低時(shí),JC-1  不能聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中,此時(shí) JC-1  為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過(guò)熒光顏色的轉(zhuǎn)變來(lái)檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來(lái)衡量線(xiàn)粒體去極化的比例。
線(xiàn)粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。通過(guò) JC-1  從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測(cè)到細(xì)胞膜電位的下降,同時(shí)也可以用 JC-1  從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。
JC-1  單體的大激發(fā)波長(zhǎng)為 515nm  ,大發(fā)射波長(zhǎng)為 529nm  ;JC-1  聚合物的大激發(fā)波長(zhǎng)為
585nm  ,大發(fā)射波長(zhǎng)為 590nm  。實(shí)際觀察時(shí),使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。
本試劑盒提供了 CCCP  作為誘導(dǎo)線(xiàn)粒體膜電位下降的陽(yáng)性對(duì)照。對(duì)于六孔板中的樣品,本試劑盒共可
以檢測(cè) 100  個(gè)樣品;對(duì)于 12  孔中的樣品,本試劑盒共可以檢測(cè) 200  個(gè)樣品。
操作步驟: 
1、JC-1 染色工作液的配制:
六孔板每孔所需 JC-1  染色工作液的量為 1mL  ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1  染色工作液的用量以此類(lèi)推;
對(duì)于細(xì)胞懸液每 50~100 萬(wàn)細(xì)胞需 0.5mL JC-1  染色工作液。取適量 JC-1  (200×), 按照每 50µL JC-1 (200
×)加入 8mL  超純水的比例稀釋 JC-1  。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1  。然后再加入 2mL JC-1  染色緩沖
液(5 ×),混勻后即為 JC-1  染色工作液。
2、 、、 、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置 陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置: :: :
把試劑盒中提供的 CCCP(10mM  )推薦按照 1  1000  ∶ 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋 10µM  ,處理
細(xì)胞 20  分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1  ,進(jìn)行線(xiàn)粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常 10µM CCCP
處理 20 分鐘后線(xiàn)粒體的膜電位會(huì)*喪失, JC-1  染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng) JC-1  染色后
應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP  的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資
料決定。
3、 、、 、對(duì)于懸浮細(xì)胞 對(duì)于懸浮細(xì)胞: :: :
(1)取 10~60  萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL  細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1  染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育 20  分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL  JC-1  染色緩沖液(5×)加入 4mL  蒸餾水的比例,配制適量的 JC-1  染色
緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心 3  ~4  分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用 JC-1  染色緩沖液 (1×)洗滌 2  次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液 (1×)重懸細(xì)胞, 600g 4 ℃離心 3~
4  分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1  染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4  ℃離心 3~4  分鐘,
沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1  染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分
光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
4、 、、 、對(duì)于貼壁細(xì)胞 對(duì)于貼壁細(xì)胞: :: :
注意:對(duì)于貼壁細(xì)胞,如果希望采用熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測(cè),可以先收集細(xì)胞,重懸后參
考懸浮細(xì)胞的檢測(cè)方法。
(1)對(duì)于六孔板的一個(gè)孔,吸除培養(yǎng)液,根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)如有必要可以用 PBS  或其它適當(dāng)溶液洗滌細(xì)胞一
次,加入 1mL  細(xì)胞培養(yǎng)液。細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含有血清和酚紅。
(2)加入 1mL JC-1  染色工作液,充分混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37℃孵育 20  分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL  JC-1  染色緩沖液(5×)加入 4mL  蒸餾水的比例,配制適量的 JC-1  染色
緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,吸除上清,用 JC-1  染色緩沖液(1×)洗滌 2  次。
(5)加入 2mL  細(xì)胞培養(yǎng)液,培養(yǎng)液中可以含有血清和酚紅。
(6)熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下觀察。
5、 、、 、對(duì)于純化的線(xiàn)粒體 對(duì)于純化的線(xiàn)粒體: :: :
(1)把配制好的 JC-1  染色工作液再用 JC-1  染色緩沖液(1×)稀釋 5  倍。
(2)0.9mL 5  倍稀釋的 JC-1  染色工作液中加入 0.1mL  總蛋白量為 10  ~100 µg  純化的線(xiàn)粒體。
(3)用熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè):混勻后直接用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行時(shí)間掃描(time scan  ),激
發(fā)波長(zhǎng)為 485nm  ,發(fā)射波長(zhǎng)為 590nm  。如果使用熒光酶標(biāo)儀,激發(fā)波長(zhǎng)不能設(shè)置為 485nm  時(shí),可以在
475~520nm  范圍內(nèi)設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)。另外,也可以參考下面步驟 6  中的波長(zhǎng)設(shè)置進(jìn)行熒光檢測(cè)。
(4)用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察:方法同下面的步驟 6  。
6、 、、 、熒光觀測(cè)和結(jié)果分析 熒光觀測(cè)和結(jié)果分析: :: :
檢測(cè) JC-1  單體時(shí)可以把激發(fā)光設(shè)置為 490nm  ,發(fā)射光設(shè)置為 530nm  ;檢測(cè) JC-1  聚合物時(shí),可以
把激發(fā)光設(shè)置為 525nm  ,發(fā)射光設(shè)置為 590nm  。
注意:此處測(cè)定熒光時(shí)不必把激發(fā)光和發(fā)射光設(shè)置在大激發(fā)波長(zhǎng)和大發(fā)射波長(zhǎng)。如使用熒光顯微
鏡觀察,檢測(cè) JC-1  單體時(shí)可以參考觀察其它綠色熒光時(shí)的設(shè)置,如觀察 GFP  或 FITC 時(shí)的設(shè)置;檢測(cè) JC-1
聚合物時(shí)可以參考觀察其它紅色熒光,如碘化丙啶或 Cy3  時(shí)的設(shè)置。出現(xiàn)綠色熒光說(shuō)明線(xiàn)粒體膜電位下降,
并且該細(xì)胞很可能處于細(xì)胞凋亡早期。出現(xiàn)紅色熒光說(shuō)明線(xiàn)粒體膜電位比較正常,細(xì)胞的狀態(tài)也比較正常。
注意事項(xiàng): :: :
1.   JC-1 (200×)在 4 ℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以 20~25℃
水浴溫育片刻全部融解后使用。
2.   必須先把 JC-1(200×)用試劑盒提供的超純水充分溶解混勻后,才可以加入 JC-1  染色緩沖液(5×)。
不可先配制 JC-1  染色緩沖液(1×)再加入 JC-1(200×),這樣 JC-1  會(huì)很難充分溶解,會(huì)嚴(yán)重影響后續(xù)的
檢測(cè)。
3.   裝載完 JC-1  后用 JC-1  染色緩沖液(1×)洗滌時(shí),使 JC-1  染色緩沖液(1×)保持 4 ℃左右,此時(shí)的洗
滌效果較好。
4.   JC-1  探針裝載完并洗滌后盡量在 30 分鐘內(nèi)完成后續(xù)檢測(cè)。在檢測(cè)前需冰浴保存。
5.   請(qǐng)勿把 JC-1  染色緩沖液(5×)全部配制成 JC-1  染色緩沖液(1×),本試劑盒使用過(guò)程中需直接使用
JC-1  染色緩沖液(5×)。
6.   如果發(fā)現(xiàn) JC-1  染色緩沖液(5×)中有沉淀,必須全部溶解后才能使用,為促進(jìn)溶解可以在 37℃加熱。
7.   CCCP 為線(xiàn)粒體電子傳遞鏈抑制劑,有毒,請(qǐng)注意小心防護(hù)。

相關(guān)文獻(xiàn):

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