樣本收集:依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,收集適量的人或小鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本。血清樣本需待血液自然凝固后離心獲取;血漿樣本則需在采血時(shí)加入抗凝劑,隨后離心分離;細(xì)胞培養(yǎng)上清按標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)流程收集,并通過(guò)離心去除細(xì)胞碎片等雜質(zhì)。收集好的樣本要妥善保存,避免反復(fù)凍融影響檢測(cè)結(jié)果。
試劑盒準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,放置在室溫(20℃ - 25℃)環(huán)境中平衡 30 分鐘,讓試劑盒內(nèi)各試劑溫度均勻,同時(shí)準(zhǔn)備好移液器、吸頭、酶標(biāo)儀等實(shí)驗(yàn)器材,并確保器材性能正常。
加樣:將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本以及空白對(duì)照按規(guī)定體積準(zhǔn)確加入微孔板對(duì)應(yīng)孔中,輕輕振蕩使樣本與包被抗體充分混勻,隨后在設(shè)定溫度下孵育特定時(shí)間。
洗板:孵育結(jié)束,棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,以徹di清除未結(jié)合的物質(zhì),減少非特異性信號(hào)干擾。每次洗滌后需將微孔板拍干,防止殘留液體影響后續(xù)反應(yīng)。
加酶標(biāo)抗體:向各孔加入適量酶標(biāo)抗體,振蕩混勻后再次孵育。
顯色與終止:加入底物顯色液,在避光條件下孵育,待顏色變化達(dá)到理想程度時(shí),加入終止液終止反應(yīng),使反應(yīng)停止在最佳檢測(cè)狀態(tài)。
結(jié)果測(cè)定:立即使用酶標(biāo)儀在規(guī)定波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確計(jì)算出樣本中嗜酸粒細(xì)胞趨化因子的含量。
高靈敏度:能夠精準(zhǔn)檢測(cè)到極低濃度的嗜酸粒細(xì)胞趨化因子,滿足對(duì)微量樣本或低表達(dá)水平的檢測(cè)需求。
特異性強(qiáng):試劑盒中的抗體對(duì) ECF 具有高度特異性,與其他類(lèi)似物質(zhì)幾乎無(wú)交叉反應(yīng),確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
重復(fù)性好:同一批樣本多次檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定,變異系數(shù)小,為科研及臨床診斷提供了可靠且可重復(fù)的數(shù)據(jù)支持。