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TIM-3 ELISA 試劑盒
TIM-3 ELISA 試劑盒是一款用于體外精準(zhǔn)定量檢測(cè)生物樣本中 T 細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子 - 3（TIM-3）含量的專業(yè)工具。TIM-3 作為一種重要的免疫調(diào)節(jié)分子，主要表達(dá)于效應(yīng) T 細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹(shù)突狀細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞表面，在免疫反應(yīng)的調(diào)控中發(fā)揮著核心作用。
在正常生理狀態(tài)下，TIM-3 參與免疫反應(yīng)的負(fù)向調(diào)控，防止免疫細(xì)胞過(guò)度活化，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)平衡。當(dāng)機(jī)體面臨疾病侵襲時(shí)，TIM-3 的表達(dá)水平會(huì)出現(xiàn)顯著變化。在慢性病毒感染性疾病，如艾滋病、丙型肝炎中，病毒持續(xù)存在導(dǎo)致免疫細(xì)胞長(zhǎng)期處于激活狀態(tài)，TIM-3 表達(dá)上調(diào)，使得免疫細(xì)胞功能耗竭，難以有效清除病毒，檢測(cè) TIM-3 含量能夠評(píng)估病毒感染后免疫功能的受損程度，為治療方案的制定和療效監(jiān)測(cè)提供依據(jù)。在自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥中，TIM-3 的異常表達(dá)破壞免疫平衡，引發(fā)免疫細(xì)胞對(duì)自身組織的攻擊，通過(guò)檢測(cè) TIM-3 水平，有助于深入了解疾病發(fā)病機(jī)制，輔助病情監(jiān)測(cè)與治療決策。在腫瘤領(lǐng)域，腫瘤微環(huán)境促使 TIM-3 在腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞上高表達(dá)，導(dǎo)致免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性受到抑制，腫瘤細(xì)胞得以免疫逃逸、增殖和轉(zhuǎn)移，因此檢測(cè) TIM-3 含量對(duì)于腫瘤的早期診斷、預(yù)后評(píng)估以及免yi治療方案的優(yōu)化具有重大意義。
該試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)。試劑盒的核心組件是預(yù)包被有抗人 TIM-3 單克隆抗體的微孔板。當(dāng)加入血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等生物樣本后，樣本中的 TIM-3 會(huì)特異性地與包被抗體結(jié)合。完成結(jié)合反應(yīng)后，通過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)的洗板步驟，能夠有效去除未結(jié)合的雜質(zhì)，為后續(xù)檢測(cè)創(chuàng)造純凈環(huán)境。隨后，加入酶標(biāo)抗人 TIM-3 抗體，它會(huì)與已結(jié)合在包被抗體上的 TIM-3 進(jìn)一步結(jié)合，形成穩(wěn)定的抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。再次進(jìn)行洗板操作，徹di清除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，接著加入底物 A 和底物 B 啟動(dòng)顯色反應(yīng)。在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的催化作用下，底物發(fā)生反應(yīng)，顏色逐漸顯現(xiàn)，且顏色的深淺與樣本中 TIM-3 的含量呈正相關(guān)。使用者借助酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），依據(jù)預(yù)先繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可精準(zhǔn)計(jì)算出樣本中 TIM-3 的濃度。
試劑盒組成科學(xué)合理，包含預(yù)包被微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體、底物 A、底物 B、終止液、濃縮洗滌液以及樣本xi釋液等。從原材料的嚴(yán)格篩選采購(gòu)，到生產(chǎn)過(guò)程中的精細(xì)制作，再到成品的多輪嚴(yán)格檢驗(yàn)，每一個(gè)環(huán)節(jié)都層層把關(guān)，確保為使用者提供質(zhì)量穩(wěn)定、結(jié)果準(zhǔn)確的試劑盒。
在操作流程方面，首先要根據(jù)樣本類型進(jìn)行妥善處理。血清樣本需自然凝固后離心取上清；血漿樣本則需使用合適的抗凝劑處理后離心；細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本若有沉淀需先離心去除。接下來(lái)，合理設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，分別準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)品和經(jīng)過(guò)稀釋的樣本。將微孔板放入 37℃恒溫箱中溫育，使抗原抗體充分反應(yīng)。溫育結(jié)束后，進(jìn)行洗板操作，這一步至關(guān)重要，務(wù)必保證洗滌充分，防止殘留物質(zhì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。加入酶標(biāo)抗體后再次溫育，由于底物對(duì)光敏感，在加入底物進(jìn)行顯色時(shí)，必須在避光條件下操作。顯色達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，加入終止液終止反應(yīng)，最后使用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。值得注意的是，不同批次的試劑盒組分嚴(yán)禁混用，整個(gè)操作過(guò)程必須嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以此保障檢測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。
