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雙縮脲鑒定蛋白質(zhì)

時(shí)間:2015-9-8閱讀:1284
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雙縮脲鑒定蛋白

蛋白質(zhì)分子中含有許多肽鍵,與雙縮脲結(jié)構(gòu)相同,在堿性溶液中能與銅離子結(jié)合紫色的化合物(稱雙縮脲反應(yīng))在一定濃度范圍,顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度生正比,故可用比色法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量,含有兩個(gè)以上的肽鍵物質(zhì)才有反應(yīng),故氨基酸無此反應(yīng)。雙縮脲反應(yīng)是指具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物在堿性條件下與Cu2+反應(yīng),生成紅紫色的絡(luò)合物.所有的蛋白質(zhì)均有此顯色反應(yīng).雙縮脲試劑就是指能與具有兩個(gè)以上肽鍵的化合物發(fā)生紅紫色顯色反應(yīng)的試劑.它是NaOH和CuSO4兩種溶液鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時(shí),常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑,發(fā)生的是雙縮脲反應(yīng)。雙縮脲反應(yīng)實(shí)質(zhì)是在堿性環(huán)境下的Cu2+與雙縮脲試劑發(fā)生的紫色反應(yīng)。而蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲(H2NOC-NH-CONH2)結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,所以蛋白質(zhì)都能與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng),可以用雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)的存在。配位化合物(coordination compound)簡(jiǎn)稱配合物,也叫錯(cuò)合物、絡(luò)合物,為一類具有特征化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物,由中心原子或離子(統(tǒng)稱中心原子)和圍繞它的稱為配位體(簡(jiǎn)稱配體)的分子或離子,*或部分由配位鍵結(jié)合形成. 雙縮脲(NH2CONHCONH2)是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱,放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。在強(qiáng)堿性溶液中,雙縮脲與二價(jià)銅離子形成紫色絡(luò)合物,稱為雙縮脲反應(yīng)應(yīng)。凡具有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵,或能夠以一個(gè)中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。此法的優(yōu)點(diǎn)是較快速 ,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點(diǎn)是靈敏度差,不適合微量蛋白的測(cè)定。

    

          



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