關(guān)于HE染色法的具體操作步驟，你都知道哪些？

HE染色原理
HE 染色法為蘇木精-伊紅染色法，是石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一，也是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中zui基礎(chǔ)、zui廣泛的技術(shù)方法。
屬性為堿性的蘇木素染色液可以使細(xì)胞著藍(lán)色，為酸性的伊紅使細(xì)胞著紅色，其結(jié)果胞核呈藍(lán)色，胞漿呈紅色。兩種不同的染色液使細(xì)胞通過顏色來改變折光率，在光鏡下呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像。
HE染色法之所以成為細(xì)胞染色zui常用的方法是因為HE染色法過程中除化學(xué)反應(yīng)外，還有物理作用中吸附、吸收效果，使HE染色提供良好的核漿對比染色效果。
HE染色實驗步驟
1、樣品制備：對于貼壁生長細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上（置于6孔板中），培養(yǎng)相應(yīng)時間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS洗滌3次。
2、樣品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。
3、染核：蘇木素染液染色2－3min，自來水洗滌。
4、分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過深，用1％鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。
5、染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。
6、吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后，中性樹膠封片。
若細(xì)胞用4％多聚甲醛固定，則染色時間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。
HE染色實驗結(jié)果
細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色，粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。著情況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，細(xì)胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時，伊紅著色由淺變深。
實驗相關(guān)用品
1、固定液：常用95％乙醇和冰丙酮
2、蘇木精染液：稱取蘇木精粉0.5g，銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均勻，濾紙過濾，備用。
3、伊紅染液：稱取0.5g水溶性伊紅染液，溶于100ml蒸餾水中。
4、稀鹽酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1％鹽酸。
5、系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。
6、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。