VitK3聯(lián)合吡柔比星抑制人膀胱癌BIU-87細胞株的實驗分析與PTEN基因蛋白表達的相關性研究

王維

南華大學

摘要：背景:膀胱癌(Bladder cancer)是泌尿系統(tǒng)zui常見的惡性腫瘤,也是全身常見腫瘤之一,其發(fā)病率在我國呈逐年升高趨勢。表淺性膀胱癌為膀胱癌的早期類型,常規(guī)行經尿道膀胱腫瘤切除術(TURBT術)后得到一定治療,但單一手術復發(fā)率高,術后結合吡柔比星等藥物進行規(guī)律膀胱灌注可以降低復發(fā)概率,表明吡柔比星聯(lián)合治療在治療膀胱癌患者中具有協(xié)同作用。Vit3為人體肝臟合成原酶必需物質,參與相關凝血因子合成,具有利尿增加解毒功能,參與細胞膜性物質修復功能,同時近來國內外不少學者報道,維生素K3對某些腫瘤細胞系的增殖具有抑制作用,能夠作用于細胞使其凋亡。近年來新發(fā)現(xiàn)的*個具有磷酸酶活性的抑癌基因PTEN基因,它不僅表現(xiàn)出抑癌基因的特性,而且還具有磷酸酶活性,能夠調節(jié)細胞的增殖和死亡,且在細胞的轉移和粘連等方面有重要作用。林延峰[44]等在對膀胱癌組織切片進行檢測后發(fā)現(xiàn),70例癌切片的PTEN表達陽性率是39%,與之相對應的癌旁組織中,PTEN的陽性表達率為100%。張建華等[45]同樣也是用免疫組化的方法來檢測PTEN蛋白的表達,結果顯示癌組織中的陽性率有53.2%,其良性病變中表達陽性率。諸多學者的研究都顯示了抑癌基因PTEN與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展有著緊密,研究PTEN對于深入了解其作用機制和為基因診療奠定理論基礎。雖然膀胱癌的治療取得了一定進展,但術后患者出現(xiàn)的高復發(fā)率成為膀胱癌臨床治療方面面臨的重大難題之一,因此探VitK3聯(lián)合吡柔比星增強其抑癌率以及探索PTEN基因的表達在吡柔比星及其聯(lián)合治療中產生的作用成為了如今研究的一個重要方面。目的:研究VitK3聯(lián)合吡柔比星對于上皮癌細胞BIU-87的影響,并分析與PTEN基因表達相關性,為臨床上膀胱聯(lián)合灌注及膀胱相關基因表達調控提供了依據(jù)。方法:培養(yǎng)人膀胱癌細胞BIU-87;使用MTT(噻唑藍)法分別篩選出吡柔比星和Vitamin K3作用于BIU-87細胞3天后的zui宜用藥濃度;設立空白對照組,吡柔比星作用組,Vitamin K3作用組、聯(lián)合用藥組,MTT法檢測各組細胞存活率;采用流式細胞儀觀察人膀胱癌BIU-87細胞培養(yǎng)株的凋亡情況,通過流式軟件分析細胞周期變化;通過Q-PCR實驗分析各個實驗組中人膀胱癌BIU-87細胞PTEN基因表達;通過Western blot實驗檢測各個實驗組BIU-87細胞中PTEN蛋白的表達;結果:吡柔比星藥物濃度在1mg/L到100mg/L濃度范圍中可以有效抑制BIU-87細胞的增殖(P<0.05);Vitamin K3藥物濃度在5 umol/L到20 umol/L的濃度范圍里可以有效抑制BIU-87細胞的增殖(P<0.05);Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星用藥抑制對于BIU-87細胞的增殖效果更好(P<0.05);采用吡柔比星1mg/L濃度干預BIU-87細胞可以促進其發(fā)生凋亡(P<0.05),使得其細胞周期阻滯于G2/M期(P<0.05),采用Vitamin K3 5 umol/L濃度干預BIU-87細胞可以促進其發(fā)生凋亡(P<0.05),但其細胞周期與陰性對照組相比較無顯著差異(P>0.05),Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星干預BIU-87細胞可以使其發(fā)生更多凋亡(P<0.05),使得BIU-87細胞周期阻滯于G2/M期(P<0.05);采用吡柔比星1mg/L濃度干預BIU-87細胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表達水平(P<0.05),采用Vitamin K35 umol/L濃度干預BIU-87細胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表達水平(P<0.05),Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星干預BIU-87細胞可以更多提高PTEN的m RNA和蛋白的表達水平(P<0.05);結論:一定濃度的Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星作用可以顯著抑制人膀胱癌細胞BIU-87的增殖,提高PTEN的表達水平,促使BIU-87細胞發(fā)生凋亡并將其細胞周期阻滯于G2/M期。 還原

關鍵詞：PTEN; 膀胱癌; VitK3; 吡柔比星;

導師：吳萬瑞; 李遠偉;

分類號：R737.14