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Stbl4 Chemically Competent Cell

參   考   價: 1180

訂  貨  量: ≥1  臺

具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-09-03 15:41:56瀏覽次數(shù):919次

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純度 99.99% 供貨周期 現(xiàn)貨
規(guī)格 100μl/支 貨號 XY9021
應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 主要用途 Stbl4菌株來源于 Stbl2 E. coli strain,可用于慢病毒載體
Stbl4 Chemically Competent Cell來源于 Stbl2 E. coli strain,可用于慢病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建。Stbl4菌株適合克隆不穩(wěn)定插入片段 (正向重復(fù)序列,逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等);mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列。

Stbl4 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

 

Stbl4:                                                              100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質(zhì)期):                                  -80℃(6個月) 

基因型

F′ proAB+ lacIqZ?M15 Tn10 (TetR)mcrA ?(mcrBC-hsdRMS-mrrrecA1 endA1 gyrA96 galthi-1 supE44 λ- relA1?(lac-proAB)

 

 

Stbl4 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

Stbl4菌株來源于 Stbl2 E. coli strain,可用于慢病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建。Stbl4菌株適合克隆不穩(wěn)定插入片段 (正向重復(fù)序列,逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等);mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列。recA 1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacIqZΔM15標記使得Stbl4菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。生產(chǎn)的Stbl4感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達1×10cfu/μg DNA。

 

操作方法

1. Stbl4感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇70分鐘。

當質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時,30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率,若轉(zhuǎn)化control pUC19計算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上,平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)17-20小時或30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)20-24小時。若轉(zhuǎn)化control pUC19計算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃培養(yǎng)過夜。

5.若要獲得大量,高純度質(zhì)粒,建議在TB培養(yǎng)基中30度搖菌培養(yǎng)(以標準質(zhì)粒PUC19為例:500ml三角瓶中加入100ml TB營養(yǎng)液,經(jīng)30度250rpm搖菌,可提取約100-200ug PUC19質(zhì)粒)

 

●TB 培養(yǎng)基配方
1.2%     Tryptone
2.4% Yeast Extract
4%        甘油
17mM   KH2PO4
72mM   K2HPO4
配制方法(1L):
1,   配制磷酸緩沖液(0.17M  KH2PO4, 0.72M  K2HPO4):
溶解2.31g KH2PO4和 12.54g K2HPO4于90ml去離子水中,定容到100ml,高壓滅菌。
2,在燒杯中加入以下試劑:Tryptone 12g, Yeast Extract    24g,甘油  4ml;加入去離子水800ml,充分溶解后,定容至900ml,高壓滅菌。
3,待溶液冷卻至60度以下,加入100ml 滅菌磷酸鹽緩沖液。

 

 

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存

放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

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