A549 (人肺癌細(xì)胞)

規(guī)格： 1*10 ⁶   

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系由D.J.Griad通過(guò)肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：肺癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，多角形；貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

收到細(xì)胞拆包：

1. 請(qǐng)立即檢查包裝袋是否有破損或漏液，如有，請(qǐng)拍照并及時(shí)與技術(shù)聯(lián)系。

2.請(qǐng)立即將細(xì)胞從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行處理。

T25 培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞操作步驟：

1. 75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供或未拍照默認(rèn)收到狀態(tài)良好。

3. 不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加配制好的培養(yǎng)基 5-6ml。放到 37 度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度到80%以上，進(jìn)行傳代。

懸浮細(xì)胞：將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基離心收集，重懸計(jì)數(shù)根據(jù)密度進(jìn)行分瓶，密度在 3x10^5/ml 為宜。 

注意：第一次傳代比例建議 1:2，之后可根據(jù)細(xì)胞密度和增殖情況適當(dāng)調(diào)整。

凍存管細(xì)胞的操作步驟：

1. 收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已揮發(fā)等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。

2. 將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至-80 度冰箱(不超過(guò)一周）或液氮保存,建議盡早復(fù)蘇。

3. 復(fù)蘇第一管后有活性狀態(tài)問(wèn)題及時(shí)與我們聯(lián)系，會(huì)有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再?gòu)?fù)蘇第二管。 注意：為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。

細(xì)胞傳代：

1. 細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；

3. 棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞復(fù)蘇：

1. 從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2. 將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3. 棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存：

1. 細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3. 用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4. 先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

適用范圍:

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為人類或者動(dòng)物疾病的治療產(chǎn)品使用。

僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動(dòng)物的治療等任何其他用途，不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù)。以實(shí)際收貨產(chǎn)品說(shuō)明書為準(zhǔn)，網(wǎng)站說(shuō)明書僅供參考。