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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0031	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

氣單胞菌通用PCR試劑盒

Aeromonas spp

產(chǎn)品及特點(diǎn)

氣單胞菌屬（Aeromonas spp.）屬于氣單胞菌科，廣泛分布于自然界，可從水源、土壤以及人的糞便中分離，引起的疾病廣泛存在于哺乳動(dòng)物（如人、鳥(niǎo)類(lèi)等）和冷血?jiǎng)游铮ㄈ珲q、魚(yú)、蛇等）中。在人類(lèi)主要引起腸內(nèi)感染和腸外感染，前者主要表現(xiàn)為胃腸炎，患者通常呈癥狀較輕的水樣腹瀉，癥狀嚴(yán)重，呈血性糞便且便中有大量白細(xì)胞者（和志賀菌引起的痢疾很相似）較少見(jiàn)，本菌是夏季腹瀉的常見(jiàn)病原菌之一，主要致病物質(zhì)為溶血毒素和細(xì)胞毒素；后者包括敗血癥、傷口、眼、關(guān)節(jié)、腹腔內(nèi)及其他感染，主要與外傷后傷口接觸了污染的水有關(guān)。因此快速靈敏檢測(cè)氣單胞菌具有重要的意義，本試劑盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增氣單胞菌 DNA，跟其他微生物無(wú)交叉反應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

氣單胞菌通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR Magic Mix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	氣單胞菌屬通用 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	氣單胞菌屬通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20 次（1mL、綠蓋）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng) 性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的細(xì)菌 DNAout 或柱式細(xì)菌 DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次免 DNA 提取的天凈沙核酸釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為 PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40 μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個(gè)	PCR 陰性對(duì)照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
氣單胞菌屬通用 PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
樣品制備陰性對(duì)照（超純水）		18 μL
樣品制備陽(yáng)性對(duì)照（氣單胞菌屬通用陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （40個(gè)循環(huán)）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	60 sec
	72℃	10 min

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 471bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò) 增，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。