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上海信裕生物科技有限公司
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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次白蠟鞘孢菌PCR試劑盒

白蠟鞘孢菌PCR試劑盒

參   考   價(jià): 1490

訂  貨  量: ≥1  件

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-08-21 13:22:20瀏覽次數(shù):2714次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-1036 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
白蠟鞘孢菌PCR試劑盒即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板,引物經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高,提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品,特異性高,引物是根據(jù)牛源性成分單重?zé)晒飧叨缺J氐?VP1 區(qū)設(shè)計(jì),PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

白蠟鞘孢菌PCR試劑盒

Chalara fraxinea PCR Kit

產(chǎn)品簡介:

熒光定量 PCR 是檢測傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測白蠟鞘孢菌的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據(jù)白蠟鞘孢菌高度保守的 VP1 區(qū)設(shè)計(jì)。

5. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

?

產(chǎn)品名稱

方法

規(guī)格

價(jià)格

白蠟鞘孢菌LAMP試劑盒

LAMP

50次

2490元

白蠟鞘孢菌 PCR試劑盒

PCR

50次

1490元

白蠟鞘孢菌染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法

50次

2490元

白蠟鞘孢菌探針法熒光定量PCR試劑盒

探針法

50次

2990

白蠟鞘孢菌PCR試劑盒包裝規(guī)格及成分:

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

白蠟鞘孢菌PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

白蠟鞘孢菌PCR 陽性對照 

(1×10E8 拷貝/μL)

50 μL(紅蓋)

試劑五

DNA 病毒裂解液試用裝

15 次(9 mL)

試劑六

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

自備試劑:DNA 模板

?

使用方法:

一.稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。

3.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二.樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性對照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 上步制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的第 4 號(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝)或第 5 號(濃度為 1×10E5 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 10 萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要 200μL 樣品,則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

8.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。?

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

5 min

 

PCR 反應(yīng)

(35 個(gè)循環(huán))

94℃

0.5 min

50℃

0.5 min(采集 SYBR 通道的 熒光信號)

72℃

0.5 min

后延伸

72℃

10 min

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9.如果只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做 2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):

成分

樣品管 N+2 個(gè)

PCR 陰性 對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix (棕色管)

10 μL

10 μL

各 10 μL

白蠟鞘孢菌PCR 引 物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

各 2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

待測樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液(2-7 號)

不加

不加

各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化)。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

六、電泳檢測 
13.如果有必要電泳確認(rèn),可取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn) 物的大小為 400 bp。

熒光定量PCR結(jié)果分析:
一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號階段、熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級增加,PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,無法計(jì)算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,故選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個(gè)重要的概念:擴(kuò)增曲線、熒光閾值、CT值。

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