禽傳染性支氣管炎病毒通用RT-PCR試劑盒

Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)

產(chǎn)品及特點

禽傳染性支氣管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus，AIBV)會引起 雞傳染性支氣管炎，主要傳播方式是病鳥從呼吸道排出病毒，經(jīng)空氣飛沫傳染給 易感鳥，此外可通過被污染的飼料、飲水、籠具等經(jīng)消化道傳染。過熱、嚴寒、 擁擠、通風不好及維生素、礦物質(zhì)供應(yīng)不足均可促使本病發(fā)生，該病的發(fā)生會給 養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品 基于 PCR 原理開發(fā),它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)禽傳染支氣管炎病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

禽傳染性支氣管炎病毒通用RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 禽傳染支氣管炎病毒 通用 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E6 拷貝/μL， 10μL 相當于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中， 充分混勻，此為 100 倍稀釋液。）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加 水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂?水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系） 3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果，陽性樣品預(yù)期得到的擴增產(chǎn)物長度為 137bp。如 果陰性對照有此擴增產(chǎn)物或陽性對照無此擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需要 分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴增產(chǎn)物、陽性對照有此擴增 產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有此擴增產(chǎn)物則為陽性， 如果無則為陰性。