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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0264	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

腦心肌炎病毒RT-PCR試劑盒

Encephalomyocarditis Virus(EMCV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

腦心肌炎病毒（Encephalomyocarditis Virus，EMCV）在分類上屬小 RNA 病毒科，心肌病毒屬，是一種無(wú)囊膜的單股正鏈 RNA 病毒。由 EMCV 引起的豬腦心肌炎是豬的一種以腦炎、心肌炎或心肌周圍炎為主要特征的急性傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了大的經(jīng)濟(jì)損失。本產(chǎn)品適用于檢測(cè)豬血清、腦、心肌以及淋巴結(jié)等組織標(biāo)本或病毒培養(yǎng)液中 EMCV 的 mRNA，適用于 EMCV 感染的輔助診斷。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。

2. 根據(jù) EMCV 的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 30uL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

腦心肌炎病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成份	規(guī)格
試劑一	2×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	750 uL（黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	100 uL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（本色蓋）
試劑四	EMCV RT-PCR 引物混合液	各 0.5 OD（白蓋）
試劑五	EMCV PCR 陽(yáng)性對(duì)照	50 uL（黃蓋）
試劑六	RNA 病毒裂解液（試用裝）	10mL
試劑七	使用手冊(cè)	1 份）

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假?yáng)性。

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?11.5μL EMCV PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬(wàn)拷貝，可以將 10uL 原液加入到 990uL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 100 倍稀釋液。再取 10uL 此稀釋液加入到 990uL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟?為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（30uL 體系） 3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品	陽(yáng)性對(duì)照	陰性對(duì)照
2×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各15 uL	15 uL	各15 uL
EMCV RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
樣品 RNA（N+2 個(gè)）	11.5 uL
EMCV RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照 10000 倍稀釋液		11.5 uL
MMLV-Taq Mix	1.5 uL	1.5 uL	1.5 uL

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過(guò)程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 分鐘
預(yù)變性	94℃	2 分鐘
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)）	94℃	30 秒
	56℃	30 秒
	72℃	30 秒
延伸	72℃	5 分鐘

5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果，陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為 286bp。如果陰性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒(méi)有此擴(kuò)增產(chǎn)物、陽(yáng)性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有此擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)性，如果無(wú)則為陰性