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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0558	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

小反芻獸疫病毒RT-PCR試劑盒

Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

小反芻獸疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性、烈性傳染病。它是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)法定的 A 類傳染病,我國將其定為Ⅰ類動(dòng)物疫病。本產(chǎn)品就是專門用于小反芻獸疫病毒的快速熒光 RT-PCR 檢測的試劑盒，在動(dòng)物或者動(dòng)物產(chǎn)品的檢測領(lǐng)域有廣泛用途，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 雙酶一管式 RT-PCR，操作簡單快捷。本試劑盒足夠 25 次 30uL 體系的 RT-PCR 反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于在遇到問題時(shí)分析原因。

4. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性高，引物是根據(jù) PPR 病毒保守的 N 基因設(shè)計(jì)，產(chǎn)物長度為 1416 bp。

小反芻獸疫病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	雙酶一管式 RT-PCR Buffer，2×	375 uL
試劑二	MMLV-Taq Mix	50 uL
試劑三	RNase-free 水	1 mL
試劑四	PPRV 專一性引物一	50 uL
試劑五	PPRV 專一性引物二	50 μL
試劑六	PPRV 陽性對照	50 μL
試劑七	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 6 個(gè)月。

自備試劑 樣品 RNA。

使用方法 注意：所有離心管用前全部短暫離心幾秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一個(gè) 30uL 體系的 RT-PCR 為例，如果體積不同，各成分用量需要適當(dāng)調(diào)節(jié)。

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout 或柱式病毒 RNAout。

二：RT-PCR 2、在一干凈的無 RNase 的 PCR 管中，按下表配制 RT-PCR 反應(yīng)體系（30 uL 體系）:

成分	樣品	陽性對照	陰性對照
RNA 模板（自備）	1-10 uL
PPRV 陽性對照		2μL
PPRV 專一性引物一	2 uL	2 uL	2 uL
PPRV 專一性引物二	2 uL	2 uL	2 uL
RNase-free 水	補(bǔ)水到 13 uL
雙酶一管式 RT-PCR Buffer	15 uL	15 uL	15 uL
MMLV-Taq Mix	2 uL	2 uL	2 uL

3、輕柔混合均勻后放入 PCR 儀中進(jìn)行 RT-PCR，反應(yīng)參數(shù)是：

過程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	60 min
預(yù)變性	94℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)）	94℃	1 min
	55℃	1 min
	72℃	2 min
延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測

4、取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在 1%瓊脂糖凝膠上電泳，正確的擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為 1416 bp。陽性對照必須出現(xiàn) 1416bp 的 PCR 產(chǎn)物，否則 PCR 體系有問題，需要尋找原因。如果陰性對照出現(xiàn) 1416bp 的 PCR 產(chǎn)物，則說明試劑或環(huán)境中有過去 PCR 產(chǎn)物的污染，需要把樣品制備和 RT-PCR 隔離進(jìn)行。