魯氏耶爾森菌PCR試劑盒

Yersinia ruckeri

產品及特點

魯氏耶爾森菌(Yersinia ruckeri)是革蘭氏陰性腸桿菌，可感染多種魚類， 鮭科魚類影響特別明顯， 是造成鮭科魚類腸炎紅嘴病(enteric redmouth diseases，ERM)的主要病原菌。被感染的魚可以觀察到異常的行為變化，包 括在水面附近游動、食欲不振和異常游動(如豎游、旋游、倒游等)；患病魚還 表現出其他體征如：眼球突出、皮膚變黑、口腔和咽喉及其周圍皮下出血、 肛門紅腫有異物流出等。魯氏耶爾森菌侵染初期出現患病典型癥狀的魚較少， 感染后短時間內疾病大規(guī)模暴發(fā)， 死亡嚴重。本產品是根據 PCR 原理開發(fā) 的魯氏耶爾森菌檢測試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經過精心優(yōu)化，專一性強，只擴魯氏耶爾森菌，與其他病原沒有交叉 反應。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

魯氏耶爾森菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設置 PCR 反應：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。