11
超液相色譜儀的發(fā)展值得期待
超液相色譜儀的發(fā)展值得期待
超液相色譜儀是分離科學中的一個全新類別，UPLC借助于HPLC(液相色法)的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。超液相色譜儀是一個新興的領域，作為世界*個商品化UPLC產品的Waters ACQUITY UPLCTM 超液相色譜儀系統(tǒng)在1996年問世，之后像安捷倫、島津等公司也陸續(xù)開始生產超色譜儀。目前，超液相色譜儀已經開始逐漸地投入液相實驗中。
超液相色譜儀法的原理與超液相色譜儀法基本相同，所改變的地方有以下幾點:
小顆粒、高性能微粒固定相的出現(xiàn)。 超液相色譜儀的色譜柱，例如常見的十八烷基硅膠鍵合柱，它的粒徑是5um，而超液相色譜儀的色譜柱，會達到3.5um，甚至1.7um。這樣的孔徑更加利于物質分離
(2)超高壓輸液泵的使用。
由于使用的色譜柱粒徑減小，使用時所產生的壓力也自然成倍增大。故液相色譜的輸液泵也相應改變成超高壓的輸液泵。
(3)高速采樣速度的靈敏檢測器。
(4)使用低擴散、低交叉污染自動進樣器。配備了針內進樣探頭和壓力輔助進樣技術;
(5)超液相色譜儀整體系統(tǒng)優(yōu)化設計。色譜工作站配備了多種軟件平臺，實現(xiàn)超液相分析方法與液相分析方法的自動轉換。
超液相色譜儀與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它縮短了分析時間，同時減少了溶劑用量降低了分析成本。
不過由于實驗過程中儀器內部壓力過大，也會產生相對應的問題。例如泵的使用壽命會相對降低，超液相色譜儀的連接部位老化速度加快，包括單向閥等部位零件容易出現(xiàn)問題等。
超液相色譜儀尤其對中藥研究領域的發(fā)展是一個極大的促進。中藥的組分復雜，分離困難等問題都可以通過超液相色譜儀法逐漸解決。在同樣條件下，UPLC能分離的色譜峰比HPLC多出一倍還多。在同樣條件下，UPLC的分辨率能夠認出更多的色譜峰。
相信在分析實驗室中超液相色譜儀會越來越普及，讓液相色譜法得到飛躍和進步。
超液相色譜儀是目前應用zui多的色譜分析方法，超液相色譜儀系統(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)；進樣系統(tǒng)要求進樣便利切換嚴密；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓超液相色譜儀的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。
使用超液相色譜儀時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，zui后通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質。超液相色譜儀作為一種重要的分析方法，超液相色譜儀廣泛的應用于化學和生化分析中。超液相色譜儀從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，超液相色譜儀的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機化合物。
超液相色譜儀主要特點
高壓——壓力可達150～300 kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 kg/cm2以上。
高速——流速為0.1～10.0 mL/min。
——塔板數(shù)可達5000/米。在一根柱中同時分離成份可達100種。
高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。
HPLC與經典液相色譜相比有以下優(yōu)點：
速度快——通常分析一個樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成。
分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到*分離效果。
靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。
色譜柱可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收——樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。