細(xì)胞復(fù)蘇經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

1. 可以提前把需要的體積的培養(yǎng)液放到培養(yǎng)瓶里，擰松瓶蓋，放到孵箱里半小時(shí)到1小時(shí)，這樣溫度和ph值都已經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)了。
 
2. 為防止凍存管在升溫時(shí)爆裂等，可以在放入水浴前就實(shí)現(xiàn)在超凈臺(tái)里把蓋子擰松一下然后再擰上。從液氮罐里拿出來(lái)不是說(shuō)一定要分秒必爭(zhēng)地放入水浴。細(xì)胞從液氮的零下1百多度升到比如負(fù)八十這個(gè)過(guò)程對(duì)細(xì)胞沒(méi)有損害。有足夠的時(shí)間handle這些。只不過(guò)一旦細(xì)胞化了，就應(yīng)該爭(zhēng)分奪秒地把它放入培養(yǎng)液了，主要是為了稀釋DMSO。常溫下高濃度DMSO對(duì)細(xì)胞的損害比較大。
 
3. 水浴溫度40℃應(yīng)該也沒(méi)問(wèn)題，但正規(guī)的protocol上從來(lái)都只說(shuō)37℃。反正應(yīng)該相差不大，但不能太高了。另外，不必等細(xì)胞全化了再?gòu)乃±锶〕鰜?lái)。只要冰塊浮起來(lái)了就差不多了。我一般zui多水浴不超過(guò)1.5分鐘。然后經(jīng)過(guò)噴酒精消毒什么的差不多又半分鐘過(guò)去了。每次都還有沒(méi)化的。先把已經(jīng)融解的部分吸到培養(yǎng)瓶里，再?gòu)呐囵B(yǎng)瓶里吸些培養(yǎng)液到凍存管里，余下的冰塊瞬間就化了，再一起吸到培養(yǎng)瓶里。