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柱式病毒RNAOUT使用手冊

時(shí)間:2017-10-16閱讀:1196
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柱式病毒RNAOUT

Column Vrial RNAOUT

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品在天澤基因一管式病毒RNAOUT的基礎(chǔ)上開發(fā)的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品中提取微量病毒RNA的產(chǎn)品,它具有下列特點(diǎn):

  • 操作簡單,整個(gè)過程只需要20分鐘左右,不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加乙醇。
  • 靈敏度高,通過RT-PCR檢測到的zui終靈敏度可以達(dá)到50拷貝/mL。
  • 安全無毒,不需要使用苯酚和氯等有機(jī)溶液。
  • 如果加上病毒離心富集步驟,zui多可以處理1.5 mL液體病毒樣品。
  • RT-PCR和熒光RT-PCR兼容。
  • 價(jià)廉物美,性價(jià)比遠(yuǎn)低于國外同類產(chǎn)品。
  • 適用于各種材料,包括血清血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等無細(xì)胞材料。

規(guī)格及成分

   成份

編號(hào)

大紙盒包裝

柱式病毒RNAout溶液A

71001A

30 mL

離心吸附柱(小提)

60911

50套

通用洗柱液

60408

50 mL

RNA洗脫液

71207

10 mL

使用手冊

1份

 

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸,4保存,有效期一年。

自備試劑

使用方法

  • 在1.5 mL離心管中加入0.1-0.2 mL液體病毒樣品。如果病毒需要富集,可以將1.5 mL液體在4℃下24000 g冷凍離心60分鐘,移棄1.3 mL后繼續(xù)操作。
  • 加入0.6 mL溶液A,振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘。注意:溶液 A 在 4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在 65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
  • 將溶液全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,室溫放置2分鐘。
  • 12,000-15,000 g室溫離心1分鐘,棄收集管中穿透液。
  • 加入0.8 mL通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000-15000 g室溫離心1分鐘,棄收集管中穿透液。
  • 12,000-15,000 g室溫離心分鐘
  • 在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-100 uL通用洗脫液,然后將離心吸附柱套入一新的1.5 mL離心管中室溫放置2分鐘。
  • 12,000-15,000 g室溫離心1分鐘,離心管中收集的樣品即為RNA。
  • RNA樣品可以直接用于RT-PCR或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),也可-80℃長期保存。

相關(guān)資料

常見人類疾病相關(guān)RNA病毒

病毒

簡稱

疾病名稱

類型

長度(Kb)

Measles virus

MV

measles

ssRNA

4.5~85

Hepatitis A Virus

HAV

hepatitis type A

ssRNA

7.5

Poliomyelitis virus

PV

polio

ssRNA

7.8

Rubella virus

RV

German measles

ssRNA

7.9

Hepatitis C Virus

HCV

hepatitis type C

ssRNA

9.3~9.4

Human immunodeficiency virus

HIV

AIDS

ssRNA

9.7

Dengue Virus

DV

dengue

ssRNA

11

Yellow fever virus

YFV

yellow fever .

ssRNA

11

Rabies virus

RV

rabies

ssRNA

11.9

Influenza A virus

IAV

influenza

ssRNA

13.5

Mumps virus

MuV

mumps

ssRNA

15.4

Ebola virus

EBV

virus hemorrhagic fever

ssRNA

19

 

疑難解答

Q:提取液體樣品/病毒核酸(RNA或DNA)為何很難?

A:原因一是量少。病毒顆粒中的RNA或DNA是作為遺傳物質(zhì)保存,每個(gè)病毒zui多只攜帶幾個(gè)拷貝(而一個(gè)細(xì)胞中有上萬種RNA分子,每種RNA有很多拷貝),同時(shí)其長度也十分有限(一般不到細(xì)胞基因組的萬分之一),樣品中病毒數(shù)往往又不是很多,使得樣品中病毒核酸的量往往比一個(gè)細(xì)胞中核酸的量還少,所以操作中十分容易丟失。另外,由于得到的核酸量很少,不能使用電泳和測OD檢測,只能通過PCR或RT-PCR檢測,而PCR或RT-PCR的條件又需要優(yōu)化,所以要確定提取是否成功十分不容易。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

柱式病毒DNAOUT(CAT#:70701-50)

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