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北京宏昌信科技有限公司
：王曉蕾
：lhcx
菌落總數(shù)的測試片檢測方法
方法編號：5011
1 適用范圍：可用于各類食品及原料中菌落總數(shù)的測定。也可用于與食品接觸的容器、操作臺和其他設(shè)備表面的衛(wèi)生檢測。
2 方法原理：將營養(yǎng)培養(yǎng)基、凝膠和氯化三苯基四氮唑（TTC）顯色劑等加載在試紙片，經(jīng)加樣、培養(yǎng)后，細(xì)菌菌落在測試片上顯現(xiàn)出紅色菌斑，通過計(jì)數(shù)報(bào)告結(jié)果。
3 操作方法
3.1樣品處理：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi)，經(jīng)充分振搖（均質(zhì)）做成1:10的稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，用1mL滅菌吸管反復(fù)吸吹制成1:100的稀釋液。以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每個(gè)稀釋度更換一支滅菌吸管。
3.2接種：一般食品選2～3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測，含菌量少的液體樣品（如食用純水和礦泉水等）可直接用原液檢測。將測試片放在水平臺面上，揭開上面的透明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻加到中央的紙片上，輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每個(gè)稀釋度接種兩片。
3.3培 養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。
4 結(jié)果判斷與計(jì)數(shù)：
4.1細(xì)菌在紙片上生長后會顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數(shù)適中（10個(gè)～100個(gè)）的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每克（或毫升）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告。大于100時(shí)，用二位有效數(shù)字，二位有效數(shù)字后面的數(shù)字，以四舍五入方法計(jì)算，并以10的指數(shù)來表示。
4.2計(jì)數(shù)原則與報(bào)告方式
4.2.1通常選擇菌落在10個(gè)～100個(gè)之間的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見下表中例次1）。國家標(biāo)準(zhǔn)菌落總數(shù)報(bào)告方式術(shù)語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單位。
4.2.2若有兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)在10個(gè)～100個(gè)之內(nèi)，兩者的比值小于2，則取其平均數(shù)，若大于2，則采用稀釋度小者報(bào)告（見下表中例次2和例次3）。
4.2.3若三個(gè)稀釋度的菌落數(shù)都有在10個(gè)～100個(gè)之內(nèi)時(shí)，應(yīng)選擇二個(gè)低數(shù)值的平均數(shù)（見下表中例次4）。
4.2.4 若三個(gè)稀釋度的菌落數(shù)均小于10個(gè)或大于100個(gè)時(shí)，應(yīng)重新試用更低或更高的稀釋度進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)；或采用均小于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui小值，或采用均大于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui大值（見下表中例次5和例次6）。
| 例次 | 稀釋度 | 兩稀釋 度之比 | 選定計(jì)數(shù) 稀釋度 | 報(bào)告方式 （個(gè)/g或 個(gè)/mL） | ||
| 10-1 | 10-2 | 10-3 | ||||
| 1 2 3 4 5 6 | 158 208 265 98 8 295 | 76 68 82 50 5 174 | 5 12 50 15 1 106 | — 1.8 6.1 — — — | 10-2 10-2、10-3 10-2 10-1、10-2 10-1 10-3 | 7.6×103 9.4×103 8.2×103 3.0×103 8.0×10 1.1×105 |
5 表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
6 注意事項(xiàng)：使用過的紙片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。
菌落數(shù)少時(shí)的情況 菌落數(shù)多時(shí)的情況